BioTechnicalフォーラム [ウエスタンの二次抗体にこだわりはありますか？]

ウエスタンの二次抗体にこだわりはありますか？

No.1638-TOPIC - 2013/04/14 (日) 17:23:23 - 二次抗体

お世話になっております。

悩みではありませんので、お茶飲み話程度に読んでいただけましたら幸いです。

一般的にウエスタンの１次抗体は論文で引用されている抗体などを優先的に選ぶと思います。

が、二次抗体はどうでしょう。
普通のHRP標識の抗マウスや抗ラビットIgG抗体ですが、何かみなさんこだわりを持って選んでいらっしゃいますか？
慣習的に実験室に置いてあるメーカーを使っているという感じでしょうか。

二次抗体のメーカー差による実験結果の差など、もし体感されたことがありましたら教えてください。

下記トピックを読んで疑問に思い、トピックを立てさせていただきました。
http://www.google.co.jp/search?hl=ja&q=%E4%BA%8C%E6%AC%A1%E4%BA%A4%E4%BB%A3%E3%80%80%E3%83%A1%E3%83%BC%E3%82%AB%E3%83%BC&lr=lang_ja
　

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No.1638-7 - 2013/04/17 (水) 10:52:11 - おお

HRPじゃなくってAPとか使っている人とかいるかな。またその他のものとか、、、そういうこだわりも聞いてみたいですね。

(無題)

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No.1638-6 - 2013/04/17 (水) 10:08:06 - ち

Secondaries 二次抗体ポータルなんてのができたみたいです。アブカム商品だけですが。

http://www.abcam.co.jp/blog/index.cfm/2013/4/4/secondary_portal?utm_campaign=Regional.JP&utm_source=Abcam.Regional&utm_medium=Email&utm_term=0417-sacond&intGoUser=2841743

(無題)

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No.1638-5 - 2013/04/15 (月) 02:18:31 - おお

IPをすることが多いので生物種間のクロスリアクトをよくきにします。そう言う観点で私の感覚ではさんたくルーズは異種の抗体に反応しやすいいんしょうがあります(一応吸収されているとかかれていますけど)。

昔はケミコンのほぼあり得る動物種すべてで吸収された抗体をえらんでました。

今はマウスにたいしてはJackson ImmunoResearch LaboratoriesのL chainスペシフィックな二次抗体をIPでない場合でも使用しています。シグナルのつよさは良好だと思ってます。IgMにたいしても強いシグナルがえられるのでまあ万能かなぁと思ってます。

一方ラビットにたいしてはいいL chainスペシフィックな二次抗体が見当たらないので、同じ会社のH+Lに対する抗体をつかってます。いちおうL chainスペシフィックなものをもってますが、かなりよわいです。場合によってはH+Lでシグナルが強すぎる場合はつかってもいいかと思うことはあります。

とういわけでIPという観点からこのとぴ、非常に興味があります。

http://www.jacksonimmuno.com/

(無題)

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No.1638-4 - 2013/04/14 (日) 22:34:26 - JJI

どこのをつかっても大差ないというのが実感です。メーカー間で価格差が大きいなあとおもいます。なんでしょうね。安価で、使用時の希釈倍率の大きいものを選ぶようにしています。またH鎖あるいはL鎖特異的というのもあるので、実験によっては、そういうものを選ぶこともあります。ええ。

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No.1638-3 - 2013/04/14 (日) 18:59:19 - ｃDNA

メーカーの差ではないのですが、ECLより発色のAP法が感度が良かったことがあります。

今思えばこれもメーカーの差だったのかもしれないですがそこまでは検証しませんでした。

(無題)

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No.1638-2 - 2013/04/14 (日) 17:51:57 - KPL

値段が安いので、KPL社(フナコシで取り扱い）のを使ってます。

量が多いのに、価格が数千円と他社よりも安いです。