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市販の染色体の調製方法 トピック削除
No.1629-TOPIC - 2013/04/11 (木) 11:23:00 - 染色体
酵母の染色体が市販されているので、それを使って実験しようと思っています。そこで、ふと疑問に思ったのですが、染色体はアガロースに包埋されいます（切断されないように）。

メーカーにこの染色体の調製方法を聞いても、よくわからないみたいな返答なのですが、市販のＤＮＡ抽出キットで染色体を回収すると、きっとＤＮＡは切断されるだろうし、
おそらく、パルスフィールド電気泳動を行って、そのバンドを切り出しているのでは？とおもうのですが、いかがでしょうか？
その際、細胞を溶解した際に発生する、タンパクや脂質成分は
パルスフィールドで別のバンドに出るので、染色体のバンドには
染色体しかないということで純度を保証しているのでしょうか？
　
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再々御礼 解決済み 削除/引用
No.1629-7 - 2013/04/11 (木) 13:45:36 - 染色体
再度ありがとうございます！！
そういう教科書があるんですね
ありがとうございます

(無題) 削除/引用
No.1629-6 - 2013/04/11 (木) 13:18:34 - AP
簡単に言うと細胞ごとアガロースに包埋してから、タンパク質性分などを溶解、消化して拡散によって洗い流すんですね。
いまや教科書（実験手引書）にも載っているようなポピュラーな方法ですね。Molecular Cloning （少なくとも3rd ed.では。 4th ed.は未読なのでわからない）でもかなりのページが割かれていますが。

御礼 解決済み 削除/引用
No.1629-5 - 2013/04/11 (木) 12:23:47 - 染色体
素人の私にもやさしくご教授くださり
ありがとうございました
御礼まで

(無題) 削除/引用
No.1629-4 - 2013/04/11 (木) 12:18:45 - ~
文献情報をもとにしたり、
ttp://www.jscc-home.jp/journal/No12_2/No12_2_99.pdf
キットを使ったり
（CHEF ゲノム DNA プラグキット　でgoogle検索）
することで、自作することができます。

市販品そのものの調整法については、メーカーに開示する義務はありませんので、単にはぐらかされたのかもしれません。

また、
>パルスフィールドなりで細胞から
>染色体のみをきれいに取ってきたいと思ったいます
取ってくるというのは、分離をしてその写真を撮る等の意味でしょうか？
または、特定の染色体のDNAのみを回収したいという意味でしょうか？

酵母ゲノムDNA丸ごとの精製であれば、もっと簡単にすることができると思いますが。

すいません　訂正 削除/引用
No.1629-3 - 2013/04/11 (木) 12:07:19 - 染色体
訂正させてください

要は、市販の染色体がどのように調整されて市販されているか知りたいと思ったので質問させていただきました
メーカ担当は素人なのか、あいまいな回答でした

この情報をもとに、私の方でもパルスフィールドなりで細胞から
染色体のみをきれいに取ってきたいと思ったいます

よろしくお願いします

(無題) 削除/引用
No.1629-2 - 2013/04/11 (木) 12:01:52 - ~
何を材料にして何をしたいのかがよく分かりません。

>染色体はアガロースに包埋されいます
これは、パルスフィールドゲル電気泳動用の分子サイズマーカーなのではないでしょうか？

>パルスフィールド電気泳動を行って、そのバンドを切り出しているのでは？とおもうのですが、いかがでしょうか？
前述の予想が正しければ、切り出されたことのないゲノムDNAが含まれているでしょう。
パルスフィールド電気泳動を行うのは、メーカーではなく使用者です。

>染色体しかないということで純度を保証しているのでしょうか？
前述の予想が正しければ、ProK処理等はされていると思いますが、DNAや染色体の純度は保証していないと思います。
また、そもそも染色体と表現する場合はDNA結合タンパク質等を含みますので、純度という表現はあまり使われないと思いますが。

市販の染色体の調製方法 削除/引用
No.1629-1 - 2013/04/11 (木) 11:23:00 - 染色体
酵母の染色体が市販されているので、それを使って実験しようと思っています。そこで、ふと疑問に思ったのですが、染色体はアガロースに包埋されいます（切断されないように）。

メーカーにこの染色体の調製方法を聞いても、よくわからないみたいな返答なのですが、市販のＤＮＡ抽出キットで染色体を回収すると、きっとＤＮＡは切断されるだろうし、
おそらく、パルスフィールド電気泳動を行って、そのバンドを切り出しているのでは？とおもうのですが、いかがでしょうか？
その際、細胞を溶解した際に発生する、タンパクや脂質成分は
パルスフィールドで別のバンドに出るので、染色体のバンドには
染色体しかないということで純度を保証しているのでしょうか？
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