Bio Technical フォーラム

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サザンブロッティングで10%SDSでプレハイブリ トピック削除
No.1530-TOPIC - 2013/03/10 (日) 15:45:49 - 通りすがり
標題通りですが、サザンブロッティングのプレハイブリで間違って10%SDS溶液を使用してしまいました(65度,1時間)。ファルマシアのHybondN+上にUVでDNAを固定しています。　この場合はDNAがメンブレンからはがれてしまってるのでしょうか？それともこれぐらいなら十分結合が保たれると期待できるのでしょうか。DNAサンプルとプローブが限られているので、みなさんの意見を参考に実験をやり直すか進めるか決めたいと思います。
　
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(無題) 削除/引用
No.1530-2 - 2013/03/10 (日) 18:36:42 - おお
http://mcb.berkeley.edu/labs/koshland/Protocols/DNA-RNA/hybsoln.html

SDS7%ぐらいのハイぶりバッファーもあるし、UVあてているなら、コバレントなけつごうもできていると思いますので、大丈夫ではないかとおもいますが、保証はできないですねぇ。。。

サザンブロッティングで10%SDSでプレハイブリ 削除/引用
No.1530-1 - 2013/03/10 (日) 15:45:49 - 通りすがり
標題通りですが、サザンブロッティングのプレハイブリで間違って10%SDS溶液を使用してしまいました(65度,1時間)。ファルマシアのHybondN+上にUVでDNAを固定しています。　この場合はDNAがメンブレンからはがれてしまってるのでしょうか？それともこれぐらいなら十分結合が保たれると期待できるのでしょうか。DNAサンプルとプローブが限られているので、みなさんの意見を参考に実験をやり直すか進めるか決めたいと思います。
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