いつも勉強させていただいています。
マウス初代細胞の不死化判定についてご教示いただきたいと思います。
今、マウス角膜上皮から初代培養を行っています。
そろそろ3か月になるところですが、いまだ増殖を続けています。
Dispaseで分離してきた初代細胞をfeederなしで播種し、passageを
続けていましたが、老化したような大型細胞が増えてきて一度増殖が
止まりかけたところでしつこく飼っていましたら、急に小型細胞が
増殖しだしました。
もしかして不死化したかと思いつつ、その後2か月ほどpassageを続けて
いますが、現在PDが30近くまで来ています。PD曲線も逆sigmoidです。
いろいろ調べますとPD100に達すれば不死化とみていいということも
わかりました。しかしこれを確認するにはまだまだ時間がかかります。
そこで、マウスの細胞が不死化したと簡便に判定できる方法があればと
思っています。ヒト細胞であればhTERTなどを調べらればいいかと思い
ますが、マウスではどうなのでしょうか。
もしご存知の方がいらっしゃいましたらご教示いただきたいと思って
います。よろしくお願いいたします。 |
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