Bio Technical フォーラム

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LDL-R トピック削除
No.1502-TOPIC - 2013/03/01 (金) 15:03:33 - Seicho
業者に聞いている最中で返答がなかなか来ず催促すると来週以降とのことで困っており、もし下記の抗体の使用経験があり、過去にお問い合わせ等で把握しておられる研究者がおられましたら教えてください。

Cayman社のLDLR polyclonal ab #10007665でproduct informationのWBデーター写真が載っているのですが、Lane1,2,3でバンドが異なる位置に検出されています。
http://www.funakoshi.co.jp/data/datasheet/CAY/10007665.pdf
Lane3については上3つのバンドに分子量が記載され本文中にも記載されているのですが、分子量が記載されていない下のバンドがLDLRでしょうかね?本文中にはマウスのLDLRが95kDaと書いているのですが、Lane2・3では太いバンドが95kDaよりも下のような気が!? また、Lane1とLane2では下に検出されているバンドの位置も異なるため、非特異的な検出なのか・・・・?
 
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No.1502-7 - 2013/03/05 (火) 12:12:24 - Seicho
おお様へ
貴重な情報をありがとうございます。

>[Re:6] おおさんは書きました :
> www.lsbio.com/Antibodies/LDL-Receptor-Antibody-LS-C108515/110546
> www.abnova.com/products/products_detail.asp?Catalog_id=PAB8804
→確かに60kDa付近に検出されていますね。

> 抗体によってはその辺りに認識するものがあるようです。Abnovaではmonomerとかかいてますが意味わかりませんね。。。pubmedでmonomer LDLRで検索したらわかるかしら。。。
>
> アミノ酸の長さからいってちょっとちいさいですね。とうさがないとしても。。。まあ当てにならないっていえばそうですが、、、
>
→ちなみに、糖鎖修飾をしていないLDLRも細胞膜上に存在していれば血液中のLDLコレステロール取り込みに関与するのでしょうかねぇ?

(無題) 削除/引用
No.1502-6 - 2013/03/04 (月) 15:27:20 - おお
www.lsbio.com/Antibodies/LDL-Receptor-Antibody-LS-C108515/110546
www.abnova.com/products/products_detail.asp?Catalog_id=PAB8804


抗体によってはその辺りに認識するものがあるようです。Abnovaではmonomerとかかいてますが意味わかりませんね。。。pubmedでmonomer LDLRで検索したらわかるかしら。。。

アミノ酸の長さからいってちょっとちいさいですね。とうさがないとしても。。。まあ当てにならないっていえばそうですが、、、

(無題) 削除/引用
No.1502-5 - 2013/03/04 (月) 14:28:01 - Seicho
おお様 御返答ありがとうございます。
>[Re:4] おおさんは書きました :
> 糖鎖がついていないやつが60kDaあたりに来るというのを見たことがあるような気がするのですが。。。検出されたバンドの大きさはどうなんでしょうか?
→まさに60kDaあたりに、ハッキリとしたバンドが検出され、バンドの大きさもproduct informationのLane2と同じくらいハッキリとしたバンドが検出されています。

(無題) 削除/引用
No.1502-4 - 2013/03/02 (土) 13:22:31 - おお
糖鎖がついていないやつが60kDaあたりに来るというのを見たことがあるような気がするのですが。。。検出されたバンドの大きさはどうなんでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.1502-3 - 2013/03/01 (金) 18:51:35 - Seicho
み様 コメント有難うございます。

>[Re:2] みさんは書きました :
>データシートを見て判断する限り、100-160の3つのバンドがfull-lengthでこれら3つの違いは糖修飾の有無によるものですよね。
>
→おっしゃるとおりだと思います。

> 下の方のバンドはcross reactかdegradation formですかね。
→cross reactであってほしいと思っています。

> レーン1はrat由来でレーン2,3はmouse由来ということだけでも若干サイズが異なる原因になりますよね。>
→私もそう考えています。rat,mouseによる種差だと考えていました。いずれにしてもhuman,rhesus monkey, cow,pigまで検出できるようなのでデーターシートでせめて分子量くらいはinformationとして欲しいと感じています。

> そもそも下の方のバンドがSeichoさんの実験でも検出されるか今のところ不明ですよね。
→そのそもそもが、見事に検出されたためご存知の方がおられたらご教授いただければと思いました。

(無題) 削除/引用
No.1502-2 - 2013/03/01 (金) 15:32:15 - み
LDL-Rに関して知っているわけではないですが、データシートを見て判断する限り、100-160の3つのバンドがfull-lengthでこれら3つの違いは糖修飾の有無によるものですよね。

下の方のバンドはcross reactかdegradation formですかね。
レーン1はrat由来でレーン2,3はmouse由来ということだけでも若干サイズが異なる原因になりますよね。coding sizeの違いくらい直ぐ調べられますよね。

siRNA処理などで確認しないと特異性は判断できないでしょうが・・・。
そもそも下の方のバンドがSeichoさんの実験でも検出されるか今のところ不明ですよね。

LDL-R 削除/引用
No.1502-1 - 2013/03/01 (金) 15:03:33 - Seicho
業者に聞いている最中で返答がなかなか来ず催促すると来週以降とのことで困っており、もし下記の抗体の使用経験があり、過去にお問い合わせ等で把握しておられる研究者がおられましたら教えてください。

Cayman社のLDLR polyclonal ab #10007665でproduct informationのWBデーター写真が載っているのですが、Lane1,2,3でバンドが異なる位置に検出されています。
http://www.funakoshi.co.jp/data/datasheet/CAY/10007665.pdf
Lane3については上3つのバンドに分子量が記載され本文中にも記載されているのですが、分子量が記載されていない下のバンドがLDLRでしょうかね?本文中にはマウスのLDLRが95kDaと書いているのですが、Lane2・3では太いバンドが95kDaよりも下のような気が!? また、Lane1とLane2では下に検出されているバンドの位置も異なるため、非特異的な検出なのか・・・・?

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