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(無題) 削除/引用 No.1495-17 - 2013/03/05 (火) 22:38:47 - ぽにゅ KENさん Trisは10 mMぐらいですね。重ねての情報をありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1495-16 - 2013/03/05 (火) 08:58:29 - KEN 自分は、Tris-HCl pH 7.5 にエタノール入れてやっています。 エタノール濃度は、80%。 EDTAは入れていません。 最後の溶出の段階でのEDTAに関しては、目的によって変えています。

(無題) 削除/引用 No.1495-15 - 2013/03/03 (日) 19:31:52 - ぽにゅ KENさん 情報をありがとうございます。 自作されているWash bufferはEDTAが入っていないのですね？次のような感じですか？ Wash buffer: 10 mM Tris, pH 8 (before use, 4 parts of Ethanol added to 1 part of buffer)

(無題) 削除/引用 No.1495-14 - 2013/03/03 (日) 16:18:35 - KEN 返信、遅くなりました。 私は、エコのスピンです。 特に、問題なく使用できております。 バッファーは、洗浄バッファーがやたら減ると思うので、自作すればよいのですが、RnaseやDNAのコンタミを防ぎたいので、1MのpH調整済みのTris-HClを買って希釈してエタノールに混ぜて使っいます。

(無題) 削除/引用 No.1495-13 - 2013/03/03 (日) 13:01:53 - ばった サイトローブ社と電話で話しました。 この安いシリカメンブレンは台湾の会社が作っていて輸入してるそうです。既に日本で何年も販売しているという理由で、無料のサンプル提供は無く、4個で1500円のを買ってくれと言われました。 たぶんどの会社の商品にしても、原価はかなり安いのでしょうね。

(無題) 削除/引用 No.1495-12 - 2013/03/03 (日) 11:00:42 - aji > 核酸精製用シリカメンブレンスピンカラム エコノスピン for DNA / for RNA > > EP-11101 > EP-11201 > EP-21201 > > http://www.funakoshi.co.jp/catalogs/%E6%A9%9F%E5%99%A8%E3%83%BB%E6%B6%88%E8%80%97%E5%93%81/%E7%B2%BE%E5%AF%86%E6%A9%9F%E5%99%A8/%E6%A0%B8%E9%85%B8%E3%81%AE%E5%88%86%E9%9B%A2%E3%83%BB%E7%B2%BE%E8%A3%BD%E7%94%A8%E5%99%A8%E5%85%B7%E3%81%8A%E3%82%88%E3%81%B3%E6%A9%9F%E5%99%A8/6726 > > 250個で22500円なので、１個90円が定価ですね。 繰り返すと回し者みたいで嫌ですが、メンブレンだけでFastGeneのより高いですよね。そういう観点からもなんでこんなに安いのか疑問なので、どなたか、使ってみたけど問題があったという方が指摘してくれると嬉しいです。

(無題) 削除/引用 No.1495-11 - 2013/03/03 (日) 07:39:49 - おお http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?start=1;mode=view;Code=1256 結局シリカの膜はグラスミルクやシリカを使いやすいように膜状にしたものなので、そのアプローチをつかえばいいかと思います。私の参考にしたものは閉じられてしまってました。PUMEDなどで公表された文献などを探すと安心できるかと思います。 お示しのものでワークすると思います。7M Guanidine HClは記憶より高いようなきがしますが、Tweenを入れたりしているからかもしれません。tweenを入れるのも初めて見ました。7M Guanidine HClはサンプルと混ぜた時濃度が落ちるためかもしれません。基本的にはイオン強度が高ければつくのでNaClでもつくはずですが、収量などがどのように影響するか未知数です。NaClでできるという記述は見たことがあります(濃度はおぼえていません5Mとかだとおもいますけど)。 あらいは80%ぐらいのエタノールでプラスミドは大丈夫だと思います。酸性に振っているのはたぶん短いPCRフラグメントとかくっつきにくいものを想定してるんじゃないかなぁと思います。RNAであれば酸性に振っておきたいというのもあるかもしれません。 溶出は水またはTEでいいと思います。洗いで酸性にふると水だと溶出してきたものが酸性に振れるかもしれませんね。 >[Re:8] ぽにゅさんは書きました : > Lysis buffer: > 7M Guanidine HCl, 50 mM Tris, 2% TWEEN ™ 20, pH 7 (β-Mercaptoethanol added to 1%) > > Wash buffer: > 10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8 (before use, 4 parts of Ethanol added to 1 part of buffer) > > Genomic DNA Elution buffer: > 10 mM Tris, 0.5 mM EDTA, pH 8 > > RNA Elution buffer: > Water > > ただしWash bufferとしては次の情報もあり: > 10mM potassium acetate (pH 5.0) > 80% ethanol > 16.7 micromol EDTA (pH 8.0) > > または、単に75-80%エタノール溶液でも良い

(無題) 削除/引用 No.1495-10 - 2013/03/02 (土) 17:29:41 - ぽにゅ KENさん カラムだけ販売してくれる会社として次を見つけました。これらを購入されていますか？ 核酸精製用シリカメンブレンスピンカラム エコノスピン for DNA / for RNA EP-11101 EP-11201 EP-21201 http://www.funakoshi.co.jp/catalogs/%E6%A9%9F%E5%99%A8%E3%83%BB%E6%B6%88%E8%80%97%E5%93%81/%E7%B2%BE%E5%AF%86%E6%A9%9F%E5%99%A8/%E6%A0%B8%E9%85%B8%E3%81%AE%E5%88%86%E9%9B%A2%E3%83%BB%E7%B2%BE%E8%A3%BD%E7%94%A8%E5%99%A8%E5%85%B7%E3%81%8A%E3%82%88%E3%81%B3%E6%A9%9F%E5%99%A8/6726 250個で22500円なので、１個90円が定価ですね。

(無題) 削除/引用 No.1495-9 - 2013/03/02 (土) 17:28:13 - ぽにゅ 文字化けしていました。 Tween20です。 古くなったキットでも、Lysis bufferにβ-Mercaptoethanolを1%になるように添加すると生き返られそうな気がします。こういう事を試された方はいらっしゃいますか？

(無題) 削除/引用 No.1495-8 - 2013/03/02 (土) 17:23:49 - ぽにゅ おおさん なんとか自力でバッファの情報を見つけられました。御記憶と一致してそうですか？ http://www.google.com/patents/US20120271042?dq=silica+membrane+DNA+buffer+preparation&hl=en&sa=X&ei=iLQxUZSxBsP_lAX96oC4Ag&ved=0CDMQ6AEwAA Lysis buffer: 7M Guanidine HCl, 50 mM Tris, 2% TWEEN ™ 20, pH 7 (β-Mercaptoethanol added to 1%) Wash buffer: 10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8 (before use, 4 parts of Ethanol added to 1 part of buffer) Genomic DNA Elution buffer: 10 mM Tris, 0.5 mM EDTA, pH 8 RNA Elution buffer: Water ただしWash bufferとしては次の情報もあり: http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2012/biotechforum.cgi?mode=view;Code=213 10mM potassium acetate (pH 5.0) 80% ethanol 16.7 micromol EDTA (pH 8.0) または、単に75-80%エタノール溶液でも良い

(無題) 削除/引用 No.1495-7 - 2013/03/01 (金) 09:22:02 - aji TSさんが紹介されているFastGene使っています。シークエンス程度の実験まではQiagenのものと遜色なく、知り合いにはいつも勧めています。サンプルもくれるので試してみるといいと思います。 使用感としてはミニプレップよりもゲル抽出の方が特にいい印象があります。10K程度の大き目の断片の回収がいいです。 当方では培養細胞は扱っていないので、毒性については分かりません。

(無題) 削除/引用 No.1495-6 - 2013/03/01 (金) 08:42:56 - おお あ、自作してもあまりコストパフォーマンスよくなかったっていってた人がいた、、、

(無題) 削除/引用 No.1495-5 - 2013/03/01 (金) 08:42:09 - TS ここも結構安いですよ。 出入り業者によれば性能も悪くないとか。 http://www.n-genetics.com/product_detail.html?item_id=4480 まだ使ったことはないんですが。 サンプルはくれますよ。

(無題) 削除/引用 No.1495-4 - 2013/03/01 (金) 08:41:50 - おお >[Re:3] ぽにゅさんは書きました : > それから３種類のバッファって自作できないでしょうか？ できるとおもいます。 バインディングで使うバッファーはグアニジン塩酸場合によってはNaI、洗のバッファーはエタノールで水が幾らか含まれている、溶出用のバッファーはTEか真水。 で濃度は今覚えてないですが探せばすぐに出てくるはず。

(無題) 削除/引用 No.1495-3 - 2013/03/01 (金) 07:19:03 - ぽにゅ 参考までに教えてください。 カラムだけ販売してくれる会社ってどこですか？ それから３種類のバッファって自作できないでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1495-2 - 2013/03/01 (金) 02:17:17 - KEN サンプルもらって、同じサンプルを使ってQiagenのカラムと比較してみるべし。 当方は、バッファーばかり余るので、別のメーカーから、カラムだけ購入していますが、特に使用感に問題ありません。 ただ、値段を見ると、記載のキットの方が、安いですね。

サイトローブ社の安いシリカメンブレンの使用感は？ 削除/引用 No.1495-1 - 2013/02/27 (水) 19:43:34 - ばった 本フォーラムの２年前の質疑で名前だけでていた、サイトローブ社の安いシリカメンブレンを購入されて使用した事のある方はいらっしゃいますか？使用感はどうでしょうか？ HiYield Plasmid Mini Kit http://www.scitrove.co.jp/rbc/YPD.html HiYield Gel/PCR DNA Fragments Extraction Kit http://www.scitrove.co.jp/rbc/YDF.html 安かろう悪かろうという事は無いでしょうか？

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