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293T細胞のコロニー数をカウント トピック削除
No.1462-TOPIC - 2013/02/20 (水) 09:25:43 - 着色マーカー
293T細胞で、コロニー数をカウントしたいのですが、50%(?)MeOH、PBS、クリスタルバイオレットで染色したところ、プレートからはがれてしまいました。

固定はなにか特別にお勧めの手法がありますか?フォルムアルデヒドなどで固定するのでしょうか?HeLaでは何もしなくても問題ないのですが。
 
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No.1462-6 - 2013/02/21 (木) 20:27:49 - 着色マーカー
~さん、qqさん、ありがとうございます。試させていただきます。

(無題) 削除/引用
No.1462-5 - 2013/02/20 (水) 20:01:29 - qq
MeOH-AcOH-DW(25:8:65)で固定(室温5分程度)すると、剥がれにくいです。その後で50%MeOHなりにすると良いかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.1462-4 - 2013/02/20 (水) 19:45:09 - ~
前にHeLaでメタノール固定で剥がれやすかったときは、PFA固定後にクリスタルバイオレットで染めました。
細胞密度が高いと剥がれやすくなるように感じました。
(シート状にめくれる感じでした)

HeLaでは剥がれないということで違う現象を見ているのかもしれませんが、試してみてはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.1462-3 - 2013/02/20 (水) 19:29:22 - 着色マーカー
培地を抜いて、洗わずに、染色液をそっといれて、10分くらいしたときです。

(無題) 削除/引用
No.1462-2 - 2013/02/20 (水) 11:54:51 - おお
どの時点ではがれたのでしょうか...

293T細胞のコロニー数をカウント 削除/引用
No.1462-1 - 2013/02/20 (水) 09:25:43 - 着色マーカー
293T細胞で、コロニー数をカウントしたいのですが、50%(?)MeOH、PBS、クリスタルバイオレットで染色したところ、プレートからはがれてしまいました。

固定はなにか特別にお勧めの手法がありますか?フォルムアルデヒドなどで固定するのでしょうか?HeLaでは何もしなくても問題ないのですが。

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