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(無題) 削除/引用 No.1350-4 - 2013/01/18 (金) 10:53:37 - TOMOMO ＞KYさん コメントありがとうございます。 質問にはポリブレンのことだけ記載させてもらいましたが、MOI、mediumの種類など他にも検討すべき点はあると承知しております。 メーカーのtechnicalサポートともやり取りしているところです。 ポリブレンを新しくすることでどれほどの効果があるか？ 「おまじない程度」とのことですので、あんまり期待できそうにはないですね。 ポリブレンには期待できないかもしれませんが、古い試薬を使い続けるのは気持ち悪いので、可能な限り条件整えて次の実験に臨みたいと思います。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1350-3 - 2013/01/18 (金) 07:41:28 - KY ウイルス感染時などにポリブレンを使用しておりますが、ポリブレンはおまじない程度のものだと考えております。実際になくてもそれほど結果がかわらないけど、入れるだけなら損はないかと思って入れている程度です。 もちろん、新しく買ってみる分にはやってみてはいいとは思いますが、ポリブレンを新しくしたところで、劇的な効果は期待できないと思います。他の要因もいろいろと検討したほうがいいです。

(無題) 削除/引用 No.1350-2 - 2013/01/18 (金) 07:22:06 - TOMOMO 質問早々、自己解決しました。 メーカーのカタログで「Freeze&Thaw禁止」と明記してあるものが見つからず、質問させてもらったのですが、Webで公開されているいくつかのラボのTransduction protocolに、Freeze&Thawは避けるように、と記載がありました。 やはりFreeze&Thawは避けたほうがいいことが確認できました. それを根拠に新しいポリブレンをボスに催促しようかと思います。 その他、ポリプレンの使用に関するアドバイスなどありましたら、よろしくお願いします。

ポリブレンの凍結融解 削除/引用 No.1350-1 - 2013/01/18 (金) 06:41:54 - TOMOMO ポリブレンの保存に関する質問です。 ready-to-useのlentivirus shRNAパーティクルを使って実験してます。細胞はマウス骨髄マクロファージ。 過去の論文などを参考に、MOIを振ってtransductionを行いましたが、期待したtrausduction効率が得られませんでした。 GFP陽性細胞は5%弱。 今回がそのshRNAを使った初めての実験だったので、これから更に色々と条件を検討するつもりです。 1点気になるのは、実験の際に使用したポリブレン。 ボスが数年前に調製し、1mlずつチューブに分注。凍結融解を繰り返したそうです。 前回の使用からは2,3年はたってるそうです。 そういったポリブレンの保存状態から、今回の実験の問題点として、ポリブレンの活性低下を疑っています。 何かのテキストで、「ポリブレンは凍結融解をしないように」との記載があったように思うのですが、一般的にポリブレンは凍結融解禁止でしょうか？ ※新しいポリブレンを購入することをボスに強くお願いする予定なのですが、「凍結融解禁止」と明記してあるカタログがあれば、それを手にボスに催促しようと思っています。 よろしくお願いします。

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