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(無題) 削除/引用 No.13228-4 - 2026/03/14 (土) 00:30:53 - gd アドバイスありがとうございます． 皮膚からだと細胞数が少なすぎて，kitを使うことを躊躇してしまいました． 取ってくる部位によってTCRのサブセットが違うので検討しないといけませんが，MACSのkitを使って脾臓から取ってみます．

(無題) 削除/引用 No.13228-3 - 2026/03/13 (金) 04:38:14 - おお Verkerk T, Pappot AT, Jorritsma T, King LA, Duurland MC, Spaapen RM, van Ham SM. Isolation and expansion of pure and functional γδ T cells. Front Immunol. 2024 Feb 15;15:1336870. doi: 10.3389/fimmu.2024.1336870. PMID: 38426099; PMCID: PMC10902048. PBMCからの単離ですが各スッテップのキャラクタライズが細かくなされているようです。皮膚からの単離でどの程度一致するかわかりませんけど。全部でないけどこれに沿って決めた方法論なら、同様の検証を（すべてでないにしろ）しながら進めてみるのもいいでしょう どんなものがどれくらい混じって、それが実験に影響を与えるのかどうか、stimulationによって細胞が変化するのか、仕方によって細胞の性質の違いが出るのかなどとりあえず把握しておくべきかと思います。そのうえで妥協しないと実験ができない場合、考察に大事な要素です。いずれにしろ完璧なプロトコールは存在しないと思いますので。 その特定の抗原刺激後もFACSなどで解析することにより、ある程度考えていること、それ以外のことなどが起こっているか検証できないですか？

(無題) 削除/引用 No.13228-2 - 2026/03/12 (木) 22:36:18 - w 専用kit売ってるよ。γδTcell mouse isolation kitで検索すれば出てくる。予算的に大丈夫そうならば、あれこれ試行錯誤するよりもそのほうがbetterと思う。T cellの仲間うちでは元々すごいマイナーな集団だし、ある程度の細胞数を確保することは現実問題として重要と思うので材料の選定はすごく大切と思う。で考えると脾臓か肝臓がいいのかもしれない。小腸のパイエル板にもいるとか書いてあった。パイエル板なら目でも見えると思う。あらかじめ何かで刺激してγδT cellを人為的に増やした状態で採取したほうがいいのかもしれない。どういう刺激でどこで増えるかとかその辺りは過去に論文あると思う。

マウスγδT細胞 削除/引用 No.13228-1 - 2026/03/12 (木) 22:03:53 - gd いつも参考にさせてもらっています． マウスの皮膚からγδT細胞（DETC）をプライマリーカルチャーしたいのですが，よいプロトコールがわかりません． フローサイトでソーティング，MACSビーズで単離，あるいはトリプシンで細胞をばらばらにしてから刺激，などありますが，どれがよいのでしょうか？実験は，特定の抗原刺激でサイトカイン産生を観察したいと思っています． 細胞株があればいいのですが見つけられないので，皮膚から取るしかないかと思っています． どうぞよろしくお願いいたします．

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