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(無題) 削除/引用 No.13225-6 - 2026/03/10 (火) 10:41:19 - おお 余談ですが、重ね方をろ紙、ゲル、メンブレン、ろ紙、ゲル、メンブレンと２段重ねにして面積は１枚と一緒の状態でトランスファーするというやり方もあるようです。個人的にはあまり良くない印象でしたが、試す機会があればどうでしょうか？ XCell SureLock™ Mini-Cell and XCell II™ Blot Moduleではうまく行ってました。 以下のトラブルシューティングでは重ねたろ紙、ゲル、メンブレンを円柱状のもので転がししっかりメンブレンとゲルをコンタクトさせると書かれてますね。ふんだんにバッファーを使ったうえでしっかりと密着させるようにこのような作業を私はしています。すでに泡が噛んでいた場合押し出せますし。バッファーが少なければそういう効果が少なそうです。 https://www.cytivalifesciences.com/en/us/news-center/5-top-western-blot-transfer-problems-and-solutions-10001

(無題) 削除/引用 No.13225-5 - 2026/03/10 (火) 10:22:22 - おお HPCL>HPLC

(無題) 削除/引用 No.13225-4 - 2026/03/10 (火) 06:20:21 - おお 私は定電流でやる派です。セミドライのときは特に、敷いたメンブレンやろ紙の上にふんだんにバッファーを乗せて重ねて行ってます。 温度が上がったため泡が出たのではというのは推察としてあり得る話だと思います（断定できるかは置いといて）。使っている水の状況によってはもしかしたら結構の量の空気が溶け込んでいるかも知れません。特に冷やすと気体の溶解度がますので。メタノールを加えると気泡が出てきますので、電気泳動（SDSPAGE）を始めるときにトランスファー用のバッファーを作ってなるべく泡が逃げるようにしています（緩やかに振ったりしてます）。 わたしは気にしていませんが、バッファーに溶け込んでいる気体が気になるなら、そのバッファーを入れた容器ごと超音波洗浄機に浸けて処理してみてください。超音波である程度溶けていた気体が弾き出されます（HPCLのバッファーを陰圧で脱気ができないときにしばしやる方法です）。 また、膜、ゲルにある程度圧がかかったほうがいいので使っているシステムによっては重しをおいたほうがいいかもしれません（圧がかかるほうが気体が放出されにくいだろうから）。装置によってはセットすると一定の電極間の距離になるものとか、上部の電極が重たいとかありますが、そういうのが配慮されてあっても、上部にアイスノンのような保冷剤を載っけておくと温度上昇による気体の発生など防げると思います。コールドルームでやるというのも手かもしれません。 実際にデーターを見ていないので泡と判断する材料はないですが、細かいつぶのような白抜けであればおそらく泡でしょう。

(無題) 削除/引用 No.13225-3 - 2026/03/08 (日) 11:20:16 - yufu fvgbhn様、ご返信ありがとうございます。 研究室内のプロトコル通りに行ったのですが、確かにメーカーの説明書等を確認するべきでした。ご指摘ありがとうございます。 bufferでぬれすぎていてもよくないのかと思い、ろ紙もbufferを染み込ませるぐらいにしていたのですが、それも気泡ができてしまう点においてはよくなかったのでしょうか？ 教えていただいた通りに、セッティング後に余剰のbufferをふき取ることを念頭に次回やってみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.13225-2 - 2026/03/07 (土) 18:47:16 - fvgbhn 定電圧ならば転写するゲルの枚数関係なく一定条件でできると思うのですが、どうでしょうか。セミドライ式だと定電圧設定の方が一般的と思うし。そのあたりメーカーに相談してみたらどうでしょうか。至適条件や上限設定など基礎データを保有していると思うので。 通電中に抵抗値がだんだん上がってくるので、終わった後である程度温度が上がる（暖かいなと感じるくらい）のは正常です。気泡が生じるほどの温度上昇や、触って熱いと感じるようならば何か問題があると思います。セミドライで通電時間が１時間というのは長すぎのように思うのですがどうでしょうか。通常はせいぜい15〜30分くらいな気がするので。 セミドライは短時間で完了する点は良いのですが、高分子量蛋白質の転写が苦手で、またセティングの際に空気が入りやすいです。ただ気泡の問題については、ろ紙に染み込ませたり、膜やゲルに付着したbufferの量をなるべく多くした状態で（結構濡れた状態で）セッティングした後で、最後に周りに溢れた余剰のbufferを拭き取ってから蓋閉めるような感じですると、ある程度、改善できると思います。 多くのbuffer量を必要とし、通電時間も長い（といってもせいぜい90分くらいですが。）wet式の方が、やや面倒だけど、初心者でも失敗は少ないです。

ウエスタンブロットの転写について 削除/引用 No.13225-1 - 2026/03/07 (土) 16:16:51 - yufu 初質問のため、至らぬ点がありましたら申し訳ございません。 ウエスタンブロットの転写について質問です。 転写後のPVDF膜でバンドの検出を行ったところ、ブロット上に白抜けた部分や一部には空気が入ったような部分のある結果になりました。 セミドライ式システムで行っており、ろ紙やPVDF膜、ゲルを置く際に空気が入っていない事を確認したにもかかわらずこのような結果になり困っています。 気になる点としては、2枚まとめて転写を行ったため、120mA/枚として240 mA, １時間で転写を行ったのですが、終わった後に転写装置が温かかったことです。 過熱されすぎて、気泡が発生する事も考えられるのでしょうか？ このような結果になる原因や解決方法についてご存じでしたらご教示いただきたいです。 よろしくお願いいたします。

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