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(無題) 削除/引用 No.13207-5 - 2026/01/28 (水) 03:11:13 - おお CMVプロモーターは血液系（あまりにも広い範囲だが）に対してあまり良くないとも聞きます。EF1とかが第一選択のように思えます。 WPREについてはHEKやSY5Yなどよく使っている細胞では機能してそうですが(ありなしで比較したわけではないので感想に過ぎませんが)、血球系に関してはよくわかりません。 https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-culture/transfection/transfection-support/transfection-selection-tool.html こちらを見るといくつかの血球細胞系でリポフェくタミン３０００を使ってますね。Virus vectorだと確かにベターかも知れませんが、それでも効率がすごく高いわけではなかった気がします。Virus vectorが使えない環境ならNucleofection（エレクトロポレーションの一種）なども視野に入るかもしれません。 P2A-eGFPについては別にそれでもいいと思いますが、C末に数ベース余分なアミノ酸がつくということは意識しておくべきだと思います。それをさけるならIRESでもいいのかもしれません。 サイズが５が１０kbpになって劇的に変わるとかいう印象はそんなにありません。大腸菌でConstruction組むときは大きいほど難しくなるという感触はありますが。 cDNAよりmRNAを導入したほうがいいという話もありますね。一過性に限った話になりますが。 もうちょっと調べて具体的な話ができれば良かったのですが、、、すいません。

(無題) 削除/引用 No.13207-4 - 2026/01/24 (土) 12:48:34 - とも 同じく第四案としてウイルス一択です。 pcDNAは絶望的な導入効率と予想します。

(無題) 削除/引用 No.13207-3 - 2026/01/23 (金) 10:29:04 - ぽいう 細胞（株？）とヒト・マウス（それ以外？）くらいは書いてもいいんじゃない？その方が有益な情報が得られる。

(無題) 削除/引用 No.13207-2 - 2026/01/23 (金) 09:18:10 - asan 血液系細胞ならレンチウイルス（レトロウイルス）一択です。 マウス由来のプライマリー、造血系ならプライマリーならMSCVとかのほうがpMXよりよいって聞きますね。

どのプラスミドを使用するべきか 削除/引用 No.13207-1 - 2026/01/22 (木) 20:05:46 - DEM 血液系の培養細胞に、WTの遺伝子と点突然変異の入った遺伝子を導入して表現型の比較を行う予定です。 pcDNAをベースに発現させる予定です。案1がいいでしょうか。経験則からくるお考えを教えていただけないでしょうか。あるいは第4案でもいいです。 案1:pcDNA3.1(+)-P2A-eGFP 血液系なので、遺伝子導入効率が悪い可能性があり、発現を確認するために、これを選択 案2:pcDNA3.1 小さいので入りやすい。 案3:pcDNA3.4 WPREがあるので発現が安定する。

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