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マウスHSCのマルチカラー染色 トピック削除
No.13201-TOPIC - 2026/01/14 (水) 13:00:40 - NNN
現在、マルチカラー染色でマウスHSC細胞の分画をとっていますが、FACSで染めたことがあるにしても自分も自分の研究室の身近な教員も2色までしか経験がありません。PE：CD34、BV421 ：CD135、Alexa 700：CD16/32、PE/Cyanine7 ：Sca-1、APC ：c-kit、FITC ：Lineageを選択して長らく実施していますが、あまりCD135やc-kitがそれほど強く光らず、苦戦しています。既報を参考に色素は選びましたが、まったく同一ではありません。有識者から見て、このパネル選択はミスチョイスでしょうか。
　
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(無題) 削除/引用
No.13201-2 - 2026/01/23 (金) 21:04:55 - ema
ソーターでの分取実験、でいいですね。顕微鏡でダイセクションなどではなく。
選択する抗体と色に関しては特に変なものではありません。
APC ：c-kit　APC自体が比較的バックグランドも低いが暗めの色になります。
BV421 ：CD135　も抗体のページで見る限り大きくシフトするようには見えません。
機器のレーザーのVoltate、Gain設定は適切でしょうか。
FMO (Fluorescence Minus One) コントロール実施して差分をはっきりさせているでしょうか。
フリーのパネルビルダーソフトもあるようですので、どうしてもきれいにできないようならば、抗原は同じで別色素の組み合わせで探してみてはいかがでしょうか。

マウスHSCのマルチカラー染色 削除/引用
No.13201-1 - 2026/01/14 (水) 13:00:40 - NNN
現在、マルチカラー染色でマウスHSC細胞の分画をとっていますが、FACSで染めたことがあるにしても自分も自分の研究室の身近な教員も2色までしか経験がありません。PE：CD34、BV421 ：CD135、Alexa 700：CD16/32、PE/Cyanine7 ：Sca-1、APC ：c-kit、FITC ：Lineageを選択して長らく実施していますが、あまりCD135やc-kitがそれほど強く光らず、苦戦しています。既報を参考に色素は選びましたが、まったく同一ではありません。有識者から見て、このパネル選択はミスチョイスでしょうか。
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