全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.13177-3 - 2025/12/17 (水) 01:15:06 - おお >[Re:1] DEMさんは書きました : > Geltrex Flex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrixをオルガノイドに使用しています。継代の際に、２つ問題があります。 > > １．ゲルが完全に除去できない。 > 論文のプロトコールを見ると、氷冷を１時間行うとほぼゲルが溶解して、その後のTriplex処理で細胞を分解するとあるのですが、なぜかゲルが溶解しません。...そもそもゲルが氷冷で溶けるというのが間違っているのではないかと思っているのですが、 コラーゲンなどのマトリクス成分は３７度（２５度以上）でゲルとして安定化しますが、低温ではほぼ溶液のように振る舞います。そしてこの性質は可逆的だと言われています。マトリクスの高次構造の構築にエネルギーが必要ということらしいです。ですから、低温にしてゲルを溶かすという作業はこの手の実験ではよくやられています。 > > > ２．また、おそらくDNAだと思うのですが、... > これはDNaseを加えたらいいんでしょうか。プロトコールにはありませんが。 DNaseを加えるのはあり得る手法ですがDNAかどうか判断ができないので、やってみて判断するか事前に何らかの確認をするか、、、 DNaseが有効なら、ゲルを４度で溶かすときに入れておくといいのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.13177-2 - 2025/12/11 (木) 13:47:15 - １ だいぶ前の実験ですので、3次元培養してた時に、コーニングのセルリカバリーソリューションというのを使ってました。時々手で静かに震盪しながら低温〜氷中で置いておくと30min-1hrくらいでゲル(Geltrex)はなくなり細胞が分散しました。細胞の生存率も良かったです。ゲルのメーカーや種類で違うかもしれませんが。

オルガノイドのゲル除去がうまくいかない 削除/引用 No.13177-1 - 2025/12/10 (水) 02:54:54 - DEM Geltrex Flex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrixをオルガノイドに使用しています。継代の際に、２つ問題があります。 １．ゲルが完全に除去できない。 論文のプロトコールを見ると、氷冷を１時間行うとほぼゲルが溶解して、その後のTriplex処理で細胞を分解するとあるのですが、なぜかゲルが溶解しません。その後のTriplex処理をしつこく行うと、ゲルが分解し始めます。そもそもゲルが氷冷で溶けるというのが間違っているのではないかと思っているのですが、どうなんでしょうか。STAR protocolを参考にしているので、そこまでいい加減なプロトコールではないと思っているのですが。 ２．また、おそらくDNAだと思うのですが、細胞の沈殿を作ると、粘性が高くなり、沈殿しないあるいは、遠心後に上澄みを除去しようとすると、距離があって、細胞がピペット動作に引っ張られる。アスピレーターで吸引しようものなら、細胞が吹っ飛んでしまいます。 これはDNaseを加えたらいいんでしょうか。プロトコールにはありませんが。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---