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(無題) 削除/引用 No.13171-2 - 2025/11/30 (日) 19:08:20 - qq Trx-H6-ThrX-target-trailerになっていると思いますが、 targetの最後にストップコドンが入っていないと、trailerの中のH6を 読んでしまいます。 そうするとThrXを切断しても、target-H6になっている可能性があります。 あなたの話では、 ＞Hisの前にスロンビンサイトがあります。 とのことですが、Hisの直後にスロンビンサイトがあります。 そして、組み換えタンパクにストップコドンが入っていなのであれば、 その後ろにもH6/T6/P6のいずれかができると思います。

スロンビンによるtag切断 削除/引用 No.13171-1 - 2025/11/29 (土) 15:21:30 - nr 質問失礼します。 現在、一本鎖抗体を大腸菌系で発現させています。ベクターはpET32aで、6×HisとTrxがtagとして付いており、Hisの前にスロンビンサイトがあります。不溶性に出るため段階透析でリフォールディングした後にスロンビンで切断しようとしているのですが、tagが切れないだけでなく非特異的な切断が多く困っています。スロンビン切断サイトの配列は確認済みです。以前別の一本鎖抗体では上手くいっていたため、なぜtagが除去できないのかわかりません。助言を頂けると助かります。

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