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(無題) 削除/引用 No.13130-6 - 2025/10/06 (月) 12:06:52 - noname 私のはSf9での話なので参考になるかわかりませんが、細胞をサンプリングするチューブをProtein Low Bindingの物を使うとばらつきが低減しました。

(無題) 削除/引用 No.13130-5 - 2025/10/06 (月) 10:09:56 - gdtm 私はよくピペッティングして均一にすることは意識しています。N=2で測定してばらつくようなら再度測定します。 古いトリパンブルーだと結晶ができていて、カウントがうまくいかなくなります。 サンプリング時のばらつきを疑うのであれば、サンプリング以降のばらつきが解決してからサンプリングをN=3で行い確かめればいいと思います。

(無題) 削除/引用 No.13130-4 - 2025/10/04 (土) 18:29:08 - １ １）少なくとも顕微鏡で見て視野のおよそ９０％以上の細胞ががsingle cellになっていること（細胞によってはsingleになりにくいものもあります。そのような時は接着系細胞ならばトリプシンの処理時間や濃度を検討してみると改善することはあります。）や、２）懸濁液の中の細胞の分布が均一であること（静置して時間が経つと沈んできますので取る前に数回ピぺっティングをしましょう）、３）細胞密度が適切な範囲であること（細胞数が多すぎてもすくなすぎても不正確なカウントの原因にになります）などオートセルカウンターに入れる以前の段階に顕微鏡で観察されていますでしょうか。ここらがクリアできてないと正確な測定は期待できないと思われます。計算版を機器に入れる前に顕微鏡でチェックしましょう。細胞数のカウントって実は結構難しいです。接着系細胞を想定して書きましたが、浮遊系細胞でも基本的に同じです。

(無題) 削除/引用 No.13130-3 - 2025/10/04 (土) 12:22:21 - 培養初心者 Bio rad のディスポの計算板？に10マイクロ入れるやつを使用しています。

(無題) 削除/引用 No.13130-2 - 2025/10/04 (土) 03:15:36 - おお オートカウンターはどんなやつですか。ディスポの血球計算盤みたいなやつを挿入して測るタイプですか？ ディスポの血球計算盤または血球計算盤のばあい 細胞によるのでしょうけど、私はなるべく１０００ulピペットチップを使ってました（容量は２００ulあればいい）。２０ー２００ulではさきが細すぎる場合があります。大きい細胞の通りが悪くなる（特に老化したとか、そういう場合で細胞骨格もがちがちになっているようで剥がれても丸くならないようなものとか）。また、たぶん２箇所細胞懸濁液をいれるところがあると思いますが、チューブからピペットでとって一箇所に入れたあと、いちどチューブに戻って吸い直してからもう一方の方に入れるようにしてました。それで吸ったときのブレがいくらかは平均化されるので。

オートカウンターでの細胞数測定 削除/引用 No.13130-1 - 2025/10/03 (金) 12:49:16 - 培養初心者 オートカウンターで細胞数（腫瘍細胞）のカウントしています。 性質上ばらつきが出てしまうのはわかるのですが、あまりにもばらつきが大きい時もあり、 細胞数をカウントして密度を合わせる操作やエンドポイントで細胞数をカウントしている実験で困っています。 至適な細胞密度などあるのかなと思っていますが、把握できていません。 細胞数カウントの流儀やコツなどあればご教授いただけると幸いです。 フラスコ内の細胞をカウントする際何 mlは培養液を取るべきだや、 ウェルレベル（1-3 ml）でカウントする時は何回カウントした平均を取るべきだなどあればご教授いただきたいです。よろしくお願いします。

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