BioTechnicalフォーラム [ブロッティング装置にて]

ブロッティング装置にて

No.131-TOPIC - 2012/02/07 (火) 18:58:12 - 英堂

WesternのSDSページで質問があります。
現在、200KDaほどのタンパク質を解析しようとしてるのですが、
アトー社のブロッターでセミドライ法をやってもバンドがうまくでません。
もし、200KDaほどのタンパク質を解析させてる方がおられましたら、
お勧めのブロッティング装置を教えて頂けないでしょうか？
　

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No.131-10 - 2012/02/08 (水) 12:53:07 - 英堂

なんだか私のいない所で議論されてますが…。
高分子ならタンク式がよさそうですね。
大変参考になりました。

(無題)

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No.131-9 - 2012/02/08 (水) 11:28:29 - TS

>200Kだからタンク式のほうがいいというのは、どういう理屈でしょう？

>大きな分子はtransferされにくくなるということはありますが

自問自答されているように、そういう理屈です。
高分子はＷｅｔのほうが転写効率がよいです。

(無題)

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No.131-8 - 2012/02/08 (水) 09:02:28 - aimar

高分子側のタンパク質はWet式の方が断然転写効率がいいです。
低分子側もほとんど抜けないですし。

semi-dry式は高分子側はゲルに残ります。

某社の技術者も一番いいのはWet式です、と言ってました。

ゲルの電気泳動後洗浄

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No.131-7 - 2012/02/08 (水) 01:10:31 - わ

ゲルは電気泳動後洗浄するものなのですか？今まで（１０年間），したことがなく，うまくいっていますが、もし、さらに、効率を高めるステップならば，試すべき価値があると思っています。トランスファーはタンク式でいつもやっています。また、カセットに挟むときに，作業工程上，トランスファーバーッファーに30秒から1分くらい浸っていますが，これが、ゲルの洗浄と考えていいのでしょうか？意見をお聞かせください。

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No.131-6 - 2012/02/07 (火) 22:45:54 - 懐疑派

200Kだからタンク式のほうがいいというのは、どういう理屈でしょう？私はあまりそういう傾向は感じたことがありません。電気泳動後のゲルの洗浄時間が長すぎるとSDSが抜けてしまってタンパクが沈殿しやすくなった結果、大きな分子はtransferされにくくなるということはありますが（洗浄時間を短くすればこの場合は解決）、転写方式には関係ないように思いますが。それぞれに至適化さえすれば。

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No.131-5 - 2012/02/07 (火) 20:43:24 - 英堂

TS様、ありがとうございます！
キャンペーン中とあって、参考にさせてもらいます。

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No.131-4 - 2012/02/07 (火) 20:36:11 - TS

>ミニトランスブロットセル

すみません、Bioradです。

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No.131-3 - 2012/02/07 (火) 19:08:17 - TS

200kDaだとタンク式がよいでしょう。
パワーサプライが必要なければ、各社から10万円以下で十分買えると思います。

私は、ミニトランスブロットセルを使っています。（ミニゲル用）
いまならキャンペーン中で７～８万円くらいだと思います。