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(無題) 削除/引用 No.1307-4 - 2013/01/06 (日) 07:48:52 - CHX >[Re:2] KYさんは書きました : > 分解速度ということは、積極的な分解を受けているタンパク質でしょうか？そうであればMG132などのプロテアソーム阻害剤を使用してみてはどうでしょう。 KYさん、ありがとうございます。 はい。積極的な分解を受けていると思います。MG132、そうですね。 > それとも内在性タンパク質の半減期を見ているという事でしょうか？ > それであれば提示されている方法以外に > http://www.nature.com/nature/journal/v473/n7347/full/nature10098.html > などで網羅的に内在性タンパク質の半減期を調べているので、そこに目的のタンパク質が含まれていれば、参考になるでしょう。 はい、結局は内在性の話になりますが、変異を入れて、外来性でも見ています。 SILACですか、、、似たようなことは可能かもしれません。いただいたヒントからもう少し展開を考えて見ます。 おおさん、コメントありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1307-3 - 2013/01/06 (日) 05:52:11 - おお TET ON/OFFを利用し、タグをつけてタグで検出すればパルスチェイスができますね。 あとGFPをつけて、顕微鏡でフォトブリーチングをしてシグナルを追っているのがありましたが、ちょっと方法論てきには納得してません。。。

(無題) 削除/引用 No.1307-2 - 2013/01/06 (日) 04:23:44 - KY 分解速度ということは、積極的な分解を受けているタンパク質でしょうか？そうであればMG132などのプロテアソーム阻害剤を使用してみてはどうでしょう。 それとも内在性タンパク質の半減期を見ているという事でしょうか？ それであれば提示されている方法以外に http://www.nature.com/nature/journal/v473/n7347/full/nature10098.html などで網羅的に内在性タンパク質の半減期を調べているので、そこに目的のタンパク質が含まれていれば、参考になるでしょう。

蛋白質の分解速度を培養細胞内で測る方法 削除/引用 No.1307-1 - 2013/01/05 (土) 23:55:05 - CHX 蛋白質の分解速度を培養細胞内で測る方法(以下以外で）を教えてください。 Cycloheximide Chase、35Sメチオニン　パルスチェイス以外に代表的なものはありますでしょうか？ またCycloheximide にほかの蛋白合成阻害剤を加えるようなことは行われるのでしょうか？　当方、この蛋白分解分野では素人なもので、現在、２重３重にチェックする必要がある状況です。

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