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(無題) 削除/引用 No.13054-3 - 2025/07/31 (木) 03:15:21 - おお Küçük C, Hu X, Gong Q, Jiang B, Cornish A, Gaulard P, McKeithan T, Chan WC. Diagnostic and Biological Significance of KIR Expression Profile Determined by RNA-Seq in Natural Killer/T-Cell Lymphoma. Am J Pathol. 2016 Jun;186(6):1435-41. doi: 10.1016/j.ajpath.2016.02.011. Epub 2016 Apr 7. PMID: 27060228; PMCID: PMC4901131. Miah SM, Campbell KS. Expression of cDNAs in human Natural Killer cell lines by retroviral transduction. Methods Mol Biol. 2010;612:199-208. doi: 10.1007/978-1-60761-362-6_13. PMID: 20033642; PMCID: PMC2798139. これリポフェくタミンをウイルスに加えてるね。 https://journals.lww.com/amit/fulltext/2015/02020/generation_of_a_genetically_engineered_aggressive.16.aspx あなたのレトロがどういうふうになっているかわかりませんが感染はするようですが、 レトロはゲノムにインテグレートさせるために細胞分裂が必要と言われてますので感染後数日通常のように培養して増殖させてから選択するのは手かもしれません。増殖させてコンフに近い状態なら密度的にも稼げるでしょう。 コンディションメディアを用意して選択するときはそれを使うという工夫もありかと思います。IL2使っているのもあったかな。 丸底のWell、試験管、コニカルチューブなどで培養しながら選択する。底の中心部によってくるので局所的に密度が高くなるので。 お示しの細胞を使ったことがないので一般的な観点から考えられることを書いてみました。

(無題) 削除/引用 No.13054-2 - 2025/07/30 (水) 21:43:19 - う まずはGFPを入れてみましょう

血球系細胞へのポリブレン法 削除/引用 No.13054-1 - 2025/07/30 (水) 20:00:56 - ぱぱぱ レトロウイルスを使って、NK様細胞株KHYG1でターゲット遺伝子の安定発現細胞株を樹立したいのですが、接着細胞に向いているポリブレンで浮遊細胞であるKHYG1にウイルス感染させることは可能でしょうか？ポリブレンとウイルス培地を入れて、1時間プレートを遠心し、感染させたのですが、G418での薬剤セレクションで全て死んでしまいました。 G418濃度が高すぎて死んだ可能性も考えていて、現在至的濃度検討を行っていますが、そもそも感染していたのか、感染するか知見をお持ちでしたら教えて頂きたいです。 また、KHYG1細胞が高密度でないと増えない細胞なので、上手くセレクションかかりかけた結果、低密度になり死んだ可能性も考えていますが、このような場合どう言った工夫が適切だと思いますか？

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