Bio Technical フォーラム

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mennekisennsyoudeDAB系とIFで結果が違いすぎる件 トピック削除
No.12985-TOPIC - 2025/06/05 (木) 23:22:16 - rty
動物組織切片の免疫染色をしています。連続切片で1枚をDAB発色系で、もう一枚は蛍光抗体法で染色したところ、Positiveな場所が異なります。というかDAB系で強陽性の細胞がIFではnegativeで逆にDABで全く反応しない細胞がIFでは染まるみたいな感じです。
それぞれnegative control(1次抗体なし)を同時に行い内在性酵素や自家蛍光や非特異的反応ではないことは毎回確認しています。
同じようなことを他にも色々やってますが、この抗体だけこんな感じです。
なんなのでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.12985-2 - 2025/06/06 (金) 01:33:13 - おお
全然素人なんですが、その蛋白の細胞内(外)の局在とかどんな感じでしょうか?
例えば(全くの例えですけど)タイトジャンクションとかにある細胞は、タイトジャンクションじしんそんなに大きくないなら、切片が違えば片方にしかないということはあるような。
核とか大きさ的にどうなんだろうかというのもあります。
またミトコンドリアとかどこ切ってもありそうですけど、核周辺に密集していることもありますし。

mennekisennsyoudeDAB系とIFで結果が違いすぎる件 削除/引用
No.12985-1 - 2025/06/05 (木) 23:22:16 - rty
動物組織切片の免疫染色をしています。連続切片で1枚をDAB発色系で、もう一枚は蛍光抗体法で染色したところ、Positiveな場所が異なります。というかDAB系で強陽性の細胞がIFではnegativeで逆にDABで全く反応しない細胞がIFでは染まるみたいな感じです。
それぞれnegative control(1次抗体なし)を同時に行い内在性酵素や自家蛍光や非特異的反応ではないことは毎回確認しています。
同じようなことを他にも色々やってますが、この抗体だけこんな感じです。
なんなのでしょうか。

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