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動物発現ベクターの構造
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No.1298-TOPIC - 2013/01/03 (木) 22:02:33 - SSKT
動物発現ベクターについて、基本的なことかもしれませんが、それだけにどこにも答えがないので、ちょっと質問です。お答えいただければ幸いです。
発現カセットの構造は、(CMVプロモーター)-(目的遺伝子)-(polyA)となっています。そのベクターをトランスフェクションして同じベクターに乗っているネオマイシンなどの薬剤耐性遺伝子で選抜しますけど、なんで、ネオマイシン遺伝子にはプロモーターやポリAがないんでしょうか? 内在性のプロモーターで動かしているんでしょうか? なくても発現するんでしょうか?
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(無題)
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No.1298-5 - 2013/01/04 (金) 09:03:13 - ~
ご自分で使われるベクターの説明書を読んでみてはいかがでしょうか。
たとえば、
http://www.pkclab.org/PKC/vector/pEGFPN1.pdf
であれば、
Descriptionにも、Location of featuresにも、情報が書かれていますね。
(無題)
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No.1298-4 - 2013/01/04 (金) 04:37:54 - おお
あとプロモーターもないと発現しませんので、上流にあるはずです。
(無題)
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No.1298-3 - 2013/01/04 (金) 02:48:07 - おお
基本的にポリAがつくようになっているはずです。
場合によってはIRESでポリシストロニックになっていたり、ウイルスを利用する場合はマルチプルな転写開始、終了位置があったり共有していたりして分かりにくくなっているかもしれません。
(無題)
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No.1298-2 - 2013/01/03 (木) 22:30:59 -
qq
どのベクタか明示していないのですから、一般論ですよね。
>なんで、ネオマイシン遺伝子にはプロモーターやポリAがないんでしょうか?
一般論として、そんなことはありません。簡単なベクタマップに書かれていない可能性はありますが、存在しないわけではありません。
プラスミドの配列を(//wishart.biology.ualberta.ca/PlasMapper/)に入れてみると、NEOの前後にアノテーションがつくこともあります。
動物発現ベクターの構造
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No.1298-1 - 2013/01/03 (木) 22:02:33 - SSKT
動物発現ベクターについて、基本的なことかもしれませんが、それだけにどこにも答えがないので、ちょっと質問です。お答えいただければ幸いです。
発現カセットの構造は、(CMVプロモーター)-(目的遺伝子)-(polyA)となっています。そのベクターをトランスフェクションして同じベクターに乗っているネオマイシンなどの薬剤耐性遺伝子で選抜しますけど、なんで、ネオマイシン遺伝子にはプロモーターやポリAがないんでしょうか? 内在性のプロモーターで動かしているんでしょうか? なくても発現するんでしょうか?
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