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(無題) 削除/引用 No.12946-3 - 2025/05/07 (水) 09:59:29 - 若手研究者 あの様 ありがとうございます。大変参考になりました。 OTCコンパウンドでコーティングした後に、-20（クリオスタット内部）または-30℃での凍結を行ってみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.12946-2 - 2025/05/06 (火) 19:16:26 - あの 原因はマイナス80度で凍結して氷晶を作らせてから、切片を切っているからです。 そのため、スクロース処理終わったら、クリオスタットに持って行き、Octコンパウンドで、 クリオスタット内部に30分ぐらい置いて、チャックに凍結固定させてから切ることです。 切った後には、一度、PBSを入れたマイクロプレート(切片の大きさに応じてウェルサイズを選ぶ)に得られた切片をうけとります。 その後で、50%スクロース入りのバッファに置き換えて、マイナス30度に凍結切片を保存です。 この方法で大抵の場合にはうまくいくと思いますが、実験スケジュールによっては、この方法を取れないことがあります。その場合には、スクロース処理後に、Octコンパウンドでサンプルをカバーして、さらにアルミほいる、さらにビニール袋に入れて、極力、氷晶を形成させないようにして、マイナス20からマイナス30度程度で保存です。

脳凍結切片の作製時、切片がボロボロになってしまいます 削除/引用 No.12946-1 - 2025/05/06 (火) 18:14:41 - 若手研究者 クライオスタットでの脳の凍結切片の作製の際、切片が横（刃と並行）にボロボロになってしまって、きれいな染色画像が得られていません。 また、染色画像撮影時に縦にも太めの黒い線が入ってしまい困っております。（恐らく、縦については凍結切片がボロボロになっていることが原因なのが明確ではありません。） 方法としましては、PFAで灌流固定後、スクロース溶液に置換した全脳を-80℃で凍結させたサンプルをクライオスタット（-20℃）にて凍結切片（30 マイクロｍ）を作製しております。 原因として考えられることと、その対策方法をご存じの方がおられましたら、ご教授して頂けると大変助かります。

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