Bio Technical フォーラム

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BigDye v3.1 バッファー トピック削除
No.12902-TOPIC - 2025/04/02 (水) 21:34:35 - DMC
BigDye v3.1でサンガーシーケンシングをやっているのですが、Dyeミックスをケチったプロトコルでやると、付属の5xバッファーが足りず、1mL一万円以上するバッファーを購入する羽目になります。バッファーを自作されてる方いますか？

検索して400 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2というレシピを見つけたのですが、付属のバッファーと比べると明らかにシーケンス結果が劣ります。
　
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(無題) 削除/引用
No.12902-4 - 2025/04/04 (金) 10:26:20 - noname
うーん、うまくいきませんでしたか。
私は標準プロトコールの1/8濃度のBig Dyeでやっていて、不都合は出たことないので、DMCさんの今やっている配列的にケチったやつだと走りにくいとか...?

(無題) 削除/引用
No.12902-3 - 2025/04/03 (木) 20:23:00 - DMC
>私の知っているレシピだとそれぞれ半分の濃度ですね。

ありがとうございます。今日試してみましたが、結果はあまりよくありませんでした。

書き忘れましたがTris-HClはpH9.0です。

(無題) 削除/引用
No.12902-2 - 2025/04/03 (木) 08:57:17 - noname
私の知っているレシピだとそれぞれ半分の濃度ですね。

BigDye v3.1 バッファー 削除/引用
No.12902-1 - 2025/04/02 (水) 21:34:35 - DMC
BigDye v3.1でサンガーシーケンシングをやっているのですが、Dyeミックスをケチったプロトコルでやると、付属の5xバッファーが足りず、1mL一万円以上するバッファーを購入する羽目になります。バッファーを自作されてる方いますか？

検索して400 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2というレシピを見つけたのですが、付属のバッファーと比べると明らかにシーケンス結果が劣ります。
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