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(無題) 削除/引用 No.12879-6 - 2025/03/15 (土) 10:02:33 - gdtm 見た目との相関があるか気になりますね。 IGF-Iを添加するタイミングではないですか。 2日間分化誘導した後に追加するのは一般的なのでしょうか。 分化初期ではなくmaturation過程での刺激が目的なら変えられないかもしれませんが。

(無題) 削除/引用 No.12879-5 - 2025/03/15 (土) 06:05:37 - おお >[Re:4] あのさんは書きました : >逆に弱める方にも変化してしまう可能性があります。培養液はFBS入りなのか、FBS濃度はどうか、BSA入り培養液などに変更する必要はないかなど検討するとよさそうです。 馬血清を使っているようですね。多分Heat inactivationしていると思いますが、Heat inactivationではそういう抑制的な因子は不活性化されないのかなぁと漠然と思ったりしますね。

(無題) 削除/引用 No.12879-4 - 2025/03/15 (土) 04:43:02 - あの まだ予備実験の段階で、本実験ではIGF１をポジコンにして、何らかの他の物質の効果をみたい計画だろうなと想像しています。 まずIGF１の最終濃度や処理時間、さらには培養液との相性を疑うべきです。既報とどこまで同じなのかよく比較してみたら良いです。 それから、IGF１には血中のバインディングプロテインが結合して、作用を強める方にも、逆に弱める方にも変化してしまう可能性があります。培養液はFBS入りなのか、FBS濃度はどうか、BSA入り培養液などに変更する必要はないかなど検討するとよさそうです。 BSAもタンパク分解酵素がないグレードのものの方が良いです。 その上で、 IGF１の最終濃度を様々にしてみて、今回の濃度よりも、たとえば100倍濃いものから、千分の１ぐらい薄いものを10倍ずつ違う濃度に振ってみて検討することを自分ならします。ホルモンって濃度依存ですから。

(無題) 削除/引用 No.12879-3 - 2025/03/15 (土) 03:24:27 - おお 腕以外の要素も私はあると思いますけどね。 どの程度減少しているのでしょうか。見た目的には分化の進み具合はどうでしょうか。MyHC の発現の立ち上がりはどちらが早いでしょうか。 と追求するならまずはそんなところでしょうけど、ポジティブコントロールとしてであればあなたの系に適していないということで違う物を探してもいいと思います。 あるいは系を少し変更するか。なるべく分化しにくい状態にするなら差が見やすくなる。もちろん闇雲に分化しにくくなるようにするのは系として成り立つかどうか微妙なこともあると思いますけど。

(無題) 削除/引用 No.12879-2 - 2025/03/15 (土) 02:20:30 - E > 以下の実験と結果に対してアドバイスやご意見いただけますと幸いです。 基本的には指導教官と話し合ってくださいね。 > IGF-1 の影響を調べるため、 > 本実験では IGF-1 をポジティブコントロールとして使用する予定でしたが、予想とは逆の結果となり、驚いています。 IGF-1の影響を調べるために、IGF-1をポジティブコントロールに使うとはこれいかに？ なぜそう予想したのですか？もし先行論文でいつもそのような結果になっているのに自分でやったら逆になったということならば、私でしたらまずは自分の腕を疑いますね。「腕」というのは実験のテクニック的なことや実験の進め方についてですね。

C2C12の実験方法について 削除/引用 No.12879-1 - 2025/03/14 (金) 21:26:38 - 122 初めまして 以下の実験と結果に対してアドバイスやご意見いただけますと幸いです。 背景・目的 (Background & Purpose) C2C12 細胞の分化における IGF-1 の影響を調べるため、IGF-1 を添加し、筋分化マーカーである MyHC（ミオシン重鎖）の発現を評価しました。 ② 実験方法 (Methods) 分化培地（DMEM + 2% HS）で C2C12 細胞を分化誘導後、Day 2 に IGF-1（100 ng/mL）を添加し、48 時間後に Western blot で MyHC の発現を定量しました。 ③ 結果 (Results) コントロールと比較して、IGF-1 添加群では MyHC の発現が低下していました。本実験では IGF-1 をポジティブコントロールとして使用する予定でしたが、予想とは逆の結果となり、驚いています。

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