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(無題) 削除/引用 No.12870-4 - 2025/03/12 (水) 06:01:34 - おお >疎水的になって細胞が剥がれにくくなる 疎水的になって細胞が剥がれやすくなる 訂正します、

(無題) 削除/引用 No.12870-3 - 2025/03/12 (水) 01:22:36 - おお 表面抗原を見るのにトリプシンは大丈夫でしょうか？PMID: 26802068ではPBSを使っているようです。PBS-EDTAでもいいのかもしれません。 どうしても剥がしにくいというのであれば、もしかしたらアップセルっていう温度を下げるとディッシュにコートしているポリマーの相転移がおこり表面が疎水的になって細胞が剥がれにくくなるディッシュなどがあります。セルシードという会社がやっていてフナコシのカタログで見つかると思います。Nuncもやっているようですが、先行がセルシードなのでライセンスなど関係があれば先行のほうがやすいかもですが、値段は確認してません。

(無題) 削除/引用 No.12870-2 - 2025/03/11 (火) 23:01:05 - mont 私自身は経験ないのですが、ラボの同僚はスクレイパーを使っています。分化後はトリプシンが効きにくく(ものすごく接着性が高い)、処理自体が細胞を刺激してしまうからだそうです。物理的刺激はいいのか？と思ったりしますが、ウチのラボではみんなスクレイパー使って回収、FACSしてます。

樹状細胞と腫瘍抗原の共培養について 削除/引用 No.12870-1 - 2025/03/11 (火) 22:44:05 - ST 樹状細胞についてお詳しい方にご質問です。 マウス樹状細胞（BMDCs）と腫瘍（MCA205）を1;1で8×10^6ずつT75フラスコ15ｍLで共培養し、翌日にCD11c microbeadsでDCのみを回収してリンパ球と共培養するという実験系を行いました。 DCはマウス大腿骨よりBMCsを回収し、GM-CSF含有培地で6-7日間培養し分化させています。腫瘍は50Gy RTでアポトーシスさせています。 腫瘍と共培養する前にDCを一部回収し、FCMでCD11c 60%程度、MHCⅡ80%程度とある程度は分化していることが確認できました。 しかし、腫瘍と共培養し翌日しっかりピペッティングして回収しても、フラスコの底に細胞がかなり残ります。念の為トリプシン/EDTAで37℃ 5min 処理してもとれませんでした。結果、beadsでCD11c陽性細胞を回収した後に、CD11c+DCが1/5ぐらいに減ってしまいました。 周りに同様のことをしている方がおらず、はたしてこの結果（回収率）が正しいのかがわかりません。。残りのCD11c陽性細胞はフラスコの底についていると思いますが、トリプシン/EDTAをつかっても剥がれないものでしょうか？ピペッティングが弱いのでしょうか？ ご教示のほど何卒よろしくお願いします。

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