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(無題) 削除/引用 No.12859-15 - 2025/03/10 (月) 16:15:36 - aa 薬剤なしのコントロールもとっていますが、同じような結果になります。 何度か見せてもらい、また見てもらうことも行っておりますが何が原因かわからない状態です。すごく小さなことが原因の可能性もあると指導教官とも相談しており餡巣。

(無題) 削除/引用 No.12859-14 - 2025/03/08 (土) 14:45:20 - おお 薬剤の影響が強く出てそうな気もしなくもないけど、、、薬剤なしのコントロールは取らないのでしょうか｡ 何か気付けないところで他の人と違うことをしてしまっている可能性があるのでしょう｡そう言うのは直接見れない人が色々発想を豊かにして指摘しても外れている方が多いと思われます｡ 上手くいっている人がいるなら一度やっているところを一部始終見せてもらうとか、観ながら同時に自分でもやってみて違いを見つける、あるいは見つけてもらうなりした方がいいです｡それか、やっているところを見てもらうか。

(無題) 削除/引用 No.12859-13 - 2025/03/08 (土) 13:40:37 - aa 6well plateで播種後24時間後に培地交換による薬剤添加を行います。 アスピレートで吸いすぎているわけではないことは確認しています。 薬剤添加する前は正常に育っているように思えますが、薬剤添加すると細胞が丸くなっているように見えます。 グルタミンは培地に含まれていることは把握してます。 同じ細胞を分け、培地の組成も全く同じもの、プレートも同じものを使用している人はうまくいくのです。薬剤も同じものを他の人が使うと上手くいきます。

(無題) 削除/引用 No.12859-12 - 2025/03/07 (金) 12:37:30 - gdtm 以前消耗品を別メーカーにしたところ、細胞増殖が悪化するケースが有りました。 ガンマ線の当て過ぎなど異物の混入によるものかと思います。 消耗品の品番など変わっていないかチェックしてみてください。 あとは、細胞自体がヘタっているなら新たに解凍した方がいいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.12859-11 - 2025/03/07 (金) 03:36:15 - おお 培地なんですが、その実験でまくときにグルタミン不含の培地をそのまま使っているとかないでしょうか？グルタミンは培養細胞ではとくにATP合成をグルタミンに依存していることがおおく、大抵の場合グルタミン不含の培地にグルタミンを入れ忘れるとまいたあとに徐々に増えなくなって来ます。

(無題) 削除/引用 No.12859-10 - 2025/03/06 (木) 20:34:07 - re 播種後、一旦は普通に接着して伸展もするけど、数日後に見るといつの間にか剥がれてる（死んでる）という感じですか。それとも播種後の接着、伸展からしてイマイチ遅いという感じなのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.12859-9 - 2025/03/06 (木) 12:02:35 - aa ご指摘いただきありがとうございます。 プレート側の問題もあり得るというところは盲点でした。 確認します。 プロトコールをどの段階まで開示していいのかが判断できないため、あやふやな質問となり申し訳ありません。 全く同じ条件で別の人が行った場合には私のような細胞の状態にはならずうまくいっているため、条件やプレートの問題はないのではと考えています。 手技的なところも何度も確認を行っていただいているのですがこれといった問題点がなく困り果てております。

(無題) 削除/引用 No.12859-8 - 2025/03/05 (水) 16:30:07 - LPS 単純ですが、十分な量の培地を使ってますか

(無題) 削除/引用 No.12859-7 - 2025/03/05 (水) 13:31:45 - おお 昔ラボにtissue culture 用の処理をしてないプレートが混じってなんだか増えるけど剥がれていくと言う事がありました｡ 他の実験では問題がなかったと言うのは培養の条件が違うからと言う事なのでしょうか？それならある程度実験のプロとコールを開示しないと的を得たアドバイスが提示されない可能性はないですか？

(無題) 削除/引用 No.12859-6 - 2025/03/05 (水) 12:16:08 - re 6 wellプレートを他社製品に変えてみたらどうでしょうか。直接でも代理店経由でもいいので無料サンプルを1,2枚お願いして試してみるなどできると思います。

(無題) 削除/引用 No.12859-5 - 2025/03/05 (水) 11:24:01 - aa 6well plateでもインキュベート時間が短い実験は問題ないです。ある一つの実験を行った際だけコンフルになりません。

(無題) 削除/引用 No.12859-4 - 2025/03/05 (水) 11:22:37 - aa コメントいただきありがとうございます。 接着は強い細胞ではないですが弱すぎるといったことはありません。 培地はフェノールレッド不含のものを用いていますが、培地の色に明らかに変化があるようなことはありません。 マイコプラズマ感染についてですがフラスコで培養しているときは正常に増殖し、また、同じ細胞を使って他の実験を行った際は何の問題もありません。 6well plateにした時だけどうしてもうまくいかないのです。

(無題) 削除/引用 No.12859-3 - 2025/03/05 (水) 06:53:00 - おお HeLaとか浮遊してきやすい細胞なんでしょうか、、、 培地の色とか、細胞の状態とかどうですか？

(無題) 削除/引用 No.12859-2 - 2025/03/04 (火) 21:02:04 - re マイコプラズマ感染してると、コンフレントになる前にcell growthが頭打ちになることがしばしばあります。培地中のアルギニンなどが分解されて枯渇するためです。なので感染の有無を市販のkitでtestしてみましょう。残念ながら陽性ならば, 少し時間がかかりますがマイコプラズマ除去試薬で綺麗にした上で、今後はできればマイコプラズマ用抗生剤を含む抗生剤混合液を使いましょう。もちろん、ありふれたcellならば、除去工程の手間考えたら再購入したほうが賢明です。

細胞実験　コンフルにならない 削除/引用 No.12859-1 - 2025/03/04 (火) 17:21:24 - aa 細胞実験を行っているのですが、6well plateでの培養を行った際に回収時に細胞がコンフルになっておらず、大半が浮遊しているような状況が５回以上あります。 培地を変えたり、試薬を無菌化したりしましたが同じ結果になります。 培地交換の際に細胞がはげすぎているといったことがないことは確認しています。 原因について何かご経験や、意見があればお願いします。

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