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(無題) 削除/引用 No.12856-5 - 2025/03/07 (金) 12:20:24 - ema 技術を磨くことが先決ですが、その後の実験染色などに問題が無いなら 川本法のシールを貼るという選択もあります。 http://section-lab.jp/Japanese/Technic/Material-2.htm

(無題) 削除/引用 No.12856-4 - 2025/03/01 (土) 14:35:56 - ふみ 切片にした際にコンパウンドから組織が脱落するなら、馴染んでいない可能性が考えられそうです。 そのような場合は、スクロース液とコンパウンドを混ぜたものを用意して、そこに浸してからコンパウンドに包埋するとうまくいったことがあります。 あるいは、組織がぱりぱりした感じで折れたり破れたりするなら、下げるというより温度は上げた方がよさげな気がします。

(無題) 削除/引用 No.12856-3 - 2025/03/01 (土) 10:03:41 - ミンオナ みさん 様々な観点から助言いただき、ありがとうございます。 手技による影響の可能性も含め、慎重に検討いたします。 また、ご指摘いただいた**「コンパウンドに入れる際にスクロースin PBSを持ち込んでいて組織が馴染んでいない可能性」についてですが、もし適切な時間や方法がありましたら、ご教示いただけますと幸いです。** 質問が多くなり恐縮ですが、貴重なご意見をいただき、大変感謝しております。

(無題) 削除/引用 No.12856-2 - 2025/02/28 (金) 17:24:09 - み 無固定の個体をダイレクトに包埋して切片作製可能です。その方が免疫染色の場合は賦活化必要ないので楽です。 それが技術的に難しいというなら単に下手なだけではないでしょうか？ 生後の脳では上手く切れる腕なのでしょうか？ 温度をもう少し下げるなり、切片の厚さを厚めにするなり試行錯誤できる部分はあるでしょう。 庫内温度が表示温度と一致しているか分かりません。 コンパウンドに入れる時にスクロースin PBSを持ち込んでいて組織がコンパウンドに馴染んでいないとか。 スクロース置換しているなら固定が長すぎて問題になることはないです。

マウス胎仔脳のクライオスタット切片化について 削除/引用 No.12856-1 - 2025/02/28 (金) 14:38:54 - ミンオナ B6系統マウスのE12.5、E13.5のクライオスタット切片化について相談があります。 現在の手順として、 4% PFAで16〜20時間、全身を浸漬固定 15%スクロースに移し替え、2日間浸透 30%スクロースに切り替え、さらに2日間浸透 OCT包埋後、凍結ブロックを作製 この後、クライオスタットで切片化を試みたところ、脳の部分が破れてしまうという問題が発生しました。 対策として、 刃を新しいものに交換 クライオスタットの温度を-22℃に変更（通常は-20℃） を試しましたが、改善が見られませんでした。 固定時間（16〜20時間）が長すぎたことが原因ではないかとも考えていますが、それ以外に考えられる原因や改善策があれば、ご助言いただけると幸いです。

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