Bio Technical フォーラム

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タンパク質精製・活性の反復 トピック削除
No.12836-TOPIC - 2025/02/15 (土) 02:07:07 - 大学院生
あるタンパク質の野生型とその変異体を大腸菌で発現・精製し、活性を測定・比較する実験を行おうと考えています。この際、n=3などに設定して実験を反復すると思うのですが、このような精製タンパク質を実験対象とする場合はこのn数とはどのレベルのことを指すのが一般的なのでしょうか?一回の精製で得たタンパク質溶液を分注して凍結保存しているのですが、@このロットを3回測定するA精製を3回行うB大腸菌への形質転換から3回行う、などの選択肢が考えられると思います。
野生型と変異体の活性値を比較する際に、それぞれの群において各データが独立である必要があると思うのですが、皆さんのラボではどうなさっていますか?
 
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(無題) 削除/引用
No.12836-2 - 2025/02/15 (土) 15:27:11 - おお
わたしなら一回のTransformationで5個ぐらいのクローンを拾い発現が5個のアベレージに近いものを3から4クローン選び各クローンから精製してn=3ないし4とします。

しかしながら同じ精製タンパク質でリピートして同じような結果が得られるかは確認します。

タンパク質精製・活性の反復 削除/引用
No.12836-1 - 2025/02/15 (土) 02:07:07 - 大学院生
あるタンパク質の野生型とその変異体を大腸菌で発現・精製し、活性を測定・比較する実験を行おうと考えています。この際、n=3などに設定して実験を反復すると思うのですが、このような精製タンパク質を実験対象とする場合はこのn数とはどのレベルのことを指すのが一般的なのでしょうか?一回の精製で得たタンパク質溶液を分注して凍結保存しているのですが、@このロットを3回測定するA精製を3回行うB大腸菌への形質転換から3回行う、などの選択肢が考えられると思います。
野生型と変異体の活性値を比較する際に、それぞれの群において各データが独立である必要があると思うのですが、皆さんのラボではどうなさっていますか?

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