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(無題) 削除/引用 No.12828-4 - 2025/02/07 (金) 18:37:38 - おお 既に指摘があるようにPFA固定だけでも膜がダメージを受けます。なので透過処理しないで細胞内の物を染めるプロトコールが存在します｡ 文献とか調べてないのでしょうか？ これも指摘がありますが、細胞表面のものだけを染めたいなら固定する前に抗体を反応させて、洗った後に固定する方法がよく取られます。

(無題) 削除/引用 No.12828-3 - 2025/02/07 (金) 17:41:59 - あの PFA 処理だと膜に穴が入って抗体が細胞内に入る確率が高いです。 30秒とか1分以内とか短時間の固定にすると多少は良いですが。 固定方法を変える必要があり、当方では次を用いました: 　https://www.funakoshi.co.jp/contents/7571 それでも、一部の細胞では内部に抗体が入ります。 無固定という手もありますが、正しく処理結果を反映した結果になる保証はないので、固定した方が良いです。

(無題) 削除/引用 No.12828-2 - 2025/02/07 (金) 17:33:37 - 774R PFA処理だけで膜に穴空きますよ。 表面だけを免疫染色したいなら生きたまま染色するしかないです。

細胞膜表面のタンパク質のIFがうまくいかない件 削除/引用 No.12828-1 - 2025/02/07 (金) 17:23:12 - drftgyh 昨日、ある薬剤で処理をしたときに起こる細胞内タンパク質の細胞膜表面への移行を免疫蛍光抗体法で調べました。薬剤処理群と無処理コントロール群の細胞を用意しました。それぞれについて、4% PFA固定（自作、メタノール不含）、室温１０分のあと、方法Aとして０.２％ TritonX処理、方法Bとして無処理　を行い、以降は両群とも通常の蛍光抗体法で染色しました。 で、薬剤処理していないので細胞膜上への移行が起こらないはずのコントロール群の細胞において、透過処理をしていない方法Bでもなぜか細胞内が染まりました。朝からずっと考えていますが原因がわからなくて今も考えてます。PFAの濃度が高すぎなのか、時間が長いのかなあ、とかも思いますが、経験ある方や、原因や対策などもし何かご存じの方いましたら教えてください。

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