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(無題) 削除/引用 No.12821-5 - 2025/02/06 (木) 12:47:18 - TF 皆様ご意見ありがとうございます。 ご意見を参考に再度条件を見直したいと思います。

(無題) 削除/引用 No.12821-4 - 2025/02/05 (水) 23:52:06 - おお 量が有ればメチレンブルーで染色して切り出せばUV使わなくてもできる｡

(無題) 削除/引用 No.12821-3 - 2025/02/05 (水) 20:32:26 - G25 切り出しの過程でNickやピリミジンダイマーができがち。UV照射とか精製過程とか。 そうなりゃ転写のtruncationが起こるでしょう。 最低限、バンド観察レーンと切り出しレーンを分けて、切り出しレーンにはUV を当てないようにする(切り離しておくとかアルミフォイルで遮光するとか)。

(無題) 削除/引用 No.12821-2 - 2025/02/05 (水) 17:27:30 - Non RNaseのコンタミでは？ 直接転写してきれいなRNAが得られるなら、それで問題ないと思いますが。

in vitro転写したRNAの質が良くない 削除/引用 No.12821-1 - 2025/02/05 (水) 16:28:36 - TF in vitro転写をした後のRNAの質が良くなく改善点をご教示いただければと思います。 DNAテンプレートをPCRで調製し、低融点アガロースゲルを用いて電気泳動し目的の長さのバンドだけを切り出して抽出しています。ゲル抽出にはQIAGENおよびNEBのキットを試しました。このゲル抽出を行ったDNAを用いてin vitro転写した後、電気泳動を行うと目的の長さのRNAの下側にスメアが確認できます。 ゲル抽出を行わずに直接転写すると問題なく1本のバンドとして見えます。 DNAサンプルの段階ではわずかに副産物が確認できるため極力ゲル抽出は行いたいと考えています。 転写に用いてるDNAサンプルの吸光度を図った際は260/280=1.8、260/230=1.8でした。ゲル抽出はエチジウムブロマイドで染色しています。

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