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タンパク質定量について トピック削除
No.12816-TOPIC - 2025/02/03 (月) 16:14:47 - Nk
現在、サンプル内のタンパク質を定量を行いたいと考えています。サンプル内にはタンパク質の他に、インドール環やベンゼン環を持った低分子化合物が多く含まれていることが判明しています。正解に近いにタンパク質量を得る定量方法はどのような方法になるでしょうか。当方、ブラッドフォード法とBCA法しか使ったことがありません。ブラッドフォード法だと低分子化合物の環状部分に反応してしまうのではないかと考えています。
 
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(無題) 削除/引用
No.12816-6 - 2025/02/06 (木) 06:32:23 - おお
>[Re:5] おおさんは書きました :
> >[Re:4] emaさんは書きました :
> > 機器があるならIRで測る
> > https://www.merckmillipore.com/JP/ja/life-science-research/protein-detection-quantification/jp-direct-detect/gh.b.qB.oBYAAAFGleN6mlav,nav
> > はお勧めです。
>
> インドールって蛋白のamide のシグナルとして検出される1800から1700のあたりに強い吸収を持ってませんか?
> https://webbook.nist.gov/cgi/inchi?ID=B6009398&Mask=80

あ、そうでもなかった。。。Transmittanceでみてた。

(無題) 削除/引用
No.12816-5 - 2025/02/06 (木) 06:27:15 - おお
>[Re:4] emaさんは書きました :
> 機器があるならIRで測る
> https://www.merckmillipore.com/JP/ja/life-science-research/protein-detection-quantification/jp-direct-detect/gh.b.qB.oBYAAAFGleN6mlav,nav
> はお勧めです。

インドールって蛋白のamide のシグナルとして検出される1800から1700のあたりに強い吸収を持ってませんか?
https://webbook.nist.gov/cgi/inchi?ID=B6009398&Mask=80

(無題) 削除/引用
No.12816-4 - 2025/02/05 (水) 15:59:08 - ema
機器があるならIRで測る
https://www.merckmillipore.com/JP/ja/life-science-research/protein-detection-quantification/jp-direct-detect/gh.b.qB.oBYAAAFGleN6mlav,nav
はお勧めです。

(無題) 削除/引用
No.12816-3 - 2025/02/04 (火) 08:59:53 - おお
プラクティカルに確認するのがいいかと思いますね。
例えば各種定量でやってみて、それをSDSPAGEに流して分離ゲルに入って数ミリでとめてCBBで染色して、同時に流したスタンダードと比較するとか。

>正解に近いにタンパク質量を得る定量方法はどのような方法になるでしょうか。
色素、アミノ酸組成で大きくぶれたりもしますので何をもって正確とするのかにもよるでしょうけど。これが絶対というのはないですよ。共存するものを考慮に入れて測定可能なものを選んでいるのが現状かと。

ブラッドフォード法やBCA法がよく使われている方法だと思います。最近はPierce 660 nm protein assayとか蛍光ベースのものも出ていますが。

https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/chemistry-protein-assays.html

(無題) 削除/引用
No.12816-2 - 2025/02/04 (火) 08:22:57 - TS
Compatibility tableからでは判断できないということでしょうか。

https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/Application-Notes/TR0068-Protein-assay-compatibility.pdf

もしそうだとすると実験的に試してみるしかないような気がします。

タンパク質定量について 削除/引用
No.12816-1 - 2025/02/03 (月) 16:14:47 - Nk
現在、サンプル内のタンパク質を定量を行いたいと考えています。サンプル内にはタンパク質の他に、インドール環やベンゼン環を持った低分子化合物が多く含まれていることが判明しています。正解に近いにタンパク質量を得る定量方法はどのような方法になるでしょうか。当方、ブラッドフォード法とBCA法しか使ったことがありません。ブラッドフォード法だと低分子化合物の環状部分に反応してしまうのではないかと考えています。

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