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(無題) 削除/引用 No.12730-6 - 2024/12/15 (日) 18:12:30 - おお >[Re:3] G25さんは書きました : > もしどうしても週末に培養して月曜日に精製する必要があるなら、私ならプログラムインキュベータで日曜日午後まで冷蔵後、37℃ o/nにするでしょう。 おお！こんな便利なものは見かけた事が無かったので盲点でした。

(無題) 削除/引用 No.12730-5 - 2024/12/15 (日) 06:07:08 - oyaji Inoue法に使うインキュベーターで２０度２日培養でできます。しかし、不安定です。アンピシリンは長時間の培養に不適です。 逆に、短時間で増殖する大腸菌を使ってます。朝コロニーを拾えば同日の１６時くらいにはミニプレップ可能です。キアゲンの方法を少し変え、２０分程度で終わるようにしています。

(無題) 削除/引用 No.12730-4 - 2024/12/14 (土) 09:55:46 - e.coli 皆様有難うございます。 プラスミドが温度感受性とは知りませんでした。 ＞もしどうしても週末に培養して月曜日に精製する必要があるなら、私ならプログラムインキュベータで日曜日午後まで冷蔵後、37℃ o/nにするでしょう。 センスのあるご回答有難うございます。 こちらで試してみます。

(無題) 削除/引用 No.12730-3 - 2024/12/14 (土) 07:13:21 - G25 多くのプラスミドベクターはpUC系のori で細胞あたり500コピーから1000コピーくらい。 しかし、30℃以下だとpBR並みの30コピー程度になります。 pUC oriはpBR ori の温度感受性変異で高い温度帯で多コピー化し高収量というメリットがあってよく利用されているわけです。 少なくとも、pUC系oriのプラスミドを精製するのに温度を下げて培養するということはしません。 もしどうしても週末に培養して月曜日に精製する必要があるなら、私ならプログラムインキュベータで日曜日午後まで冷蔵後、37℃ o/nにするでしょう。

(無題) 削除/引用 No.12730-2 - 2024/12/14 (土) 06:34:30 - おお 大腸菌あたりのプラスミドのコピー数（収量）が温度依存性なのでわざわざ必要量取れるか取れないかわからない状況でミニプレップするだろうかというのが正直な感想。 １０度から１３度くらいでバクテリアの増殖はほとんどしなくなるのでそれより若干高ければ増殖という意味ではコントロールできるであろうとは言える。このような数字は食品の保存の目安とされているはず。 https://schaechter.asmblog.org/schaechter/2022/02/when-its-too-cold-to-grow.html こちらでは"The minimum temperature of growth for E. coli is 7.8°C." と書かれてますね https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/09593331003663328?scroll=top&needAccess=true こちらの文献で温度とDoubling timeの関係がプロットされた図が見れますが、細かい内容はみれません。図を見た感覚的にはやはり２０度以下かなという気がします。 コンピテントを作るとき増殖をコントロールするために１８度くらいで増殖させることがありますが、数mlを２００mlぐらいの培地に移し替えてオーバーナイトでODが 0.5付近になるように工夫されています。ただ培地はLBよりリッチだったと思います。１８度で２オーバーナイトくらいかなとも思えますので３オーバーナイトならもう少し低いほうがいいかなと言う感覚ですね。 最初に書きましたが、増殖がコントロールできたところで、プラスミドを取るには実用的かという点で疑問です。 金曜日にコロニーを拾うなら、土曜日に遠心して回収してとりあえずは凍結するくらいがいいのではと思いますが。

miniprep用の大腸菌培養を2日間、or 3日間やる場合 削除/引用 No.12730-1 - 2024/12/13 (金) 18:48:18 - e.coli 通常miniprep用の大腸菌を培養する場合、37℃で20時間前後で培養するが、2日間 or 3日間培養をルーティーンでされている方はいますか。 その場合、それぞれ何度で培養していますか。 例えば金曜日に仕込み、月曜日にminiprepをしたい。 LBamp 1.5mL で培養しています。

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