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(無題) 削除/引用 No.12689-7 - 2024/11/18 (月) 17:02:00 - G25 >pHを下げる だけでなく、陰イオンとしてCl-を入れるというのも

(無題) 削除/引用 No.12689-6 - 2024/11/18 (月) 15:53:17 - G25 ・タンパク質にSDSを抱合させる。SDSを抱合させないとタンパク質ごとに分子量と電荷の比が一定せず、分子量と移動度の相関がバラバラになる。 ボイル処理はSDSの抱合を促進するためですが、逆にSDSがないとボイルでタンパク質が凝固してしまうでしょう。 ・還元剤でジスルフィド結合を切る。 ・pHを下げる->stackingによってサンプルが線状に濃縮。バンドをシャープにする。 >今度、ウェスタンブロッティングをするのですが、サンプル濃度が薄く、1lane当たりの添加量がlaneの許容量を超えてしまっています。 そんなときは、 サンプルタンパク質をTCAやアセトンで沈殿して（TCA沈殿はアセトンなどで十分に洗浄する）乾燥後、少量のサンプルバッファーに懸濁するなどの方法があります。

(無題) 削除/引用 No.12689-5 - 2024/11/18 (月) 15:39:49 - み 重石：Glycerol 可視化：BPB あと３つ重要な役割があるかな 蛋白アプライ量が半分になってもexposeの時間が２、３倍になるくらいじゃないですか？ もちろんサンプル、抗原種、抗体によっては半分になったら検出限界以下になってしまうものもあるかもしれんけど。 サンプルバッファーは２ｘで薄まってしまうなら４ｘとか調製できるけどね。

(無題) 削除/引用 No.12689-4 - 2024/11/18 (月) 15:32:06 - う 困っていることと、質問が合っていないと思うのですが、 濃いサンプルバッファー、４ｘとかを使うとか、ウエルサイズの大きいゲルを使うとかが、対応策でしょう

(無題) 削除/引用 No.12689-2 - 2024/11/18 (月) 15:13:57 - おお >[Re:1] ゆなうなさんは書きました : > > もしそれ以外の意味がないのなら、 ありますよ。バッファーに何が入ってますか？それぞれ意味がありますえ。

ウェスタンブロッティングにおけるサンプルバッファーの意味 削除/引用 No.12689-1 - 2024/11/18 (月) 15:04:03 - ゆなうな お世話になります。 今度、ウェスタンブロッティングをするのですが、サンプル濃度が薄く、1lane当たりの添加量がlaneの許容量を超えてしまっています。 そこでお尋ねしたのですが、サンプルバッファーは泳動にあたってどういった意味があるのでしょうか。 サンプルバッファーには、 �@タンパク質の泳動を助けるため（重石の役割）と�A泳動がどこまで進んだかを確認するマーカーの役割 があると理解しています。 もしそれ以外の意味がないのなら、サンプルに添加する量を減らすことを考えています。 どうぞよろしくお願いいたします。

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