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(無題) 削除/引用 No.12666-4 - 2024/11/06 (水) 12:16:28 - Mitoma ありがとうございます。参考になりました。まずはシクロヘキミドを試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.12666-3 - 2024/11/05 (火) 04:05:16 - おお シクロヘキミドが簡便な方法としてよく使われます。ただし古典的な生化学的アプローチでより良いのはパルスチェイスだと言われてきました。ラジオアイソトープを使うのがそのひとつの方法ですが、今は使えない研究室も多いかと思います。代替としてラベルされたアミノ酸をつかうというのがあったはずですが、興味があれば自身で調べてみてください。もう一つの方法はMSを使うやり方ですが、たしか安定同位体でラベルして時間ごとにその量が減ることを調べるという方法だったと思います。これも興味があれば調べてみればどうですか？

(無題) 削除/引用 No.12666-2 - 2024/11/03 (日) 15:40:38 - 独り言 分解であれば、MG132でプロテアソーム阻害時に増加するのか、またはbafilomycinAなどのリソソーム阻害剤で増加するかを見れるかもしれません。 ただ、安定性というか半減期的なものをみるのであれば、まずはシクロヘキミドで合成をストップして、経時的にタンパク質量が減少していく速度がXとdTomatoで異なるのかをみるとよいのでは。

タンパク分解速度の評価法について 削除/引用 No.12666-1 - 2024/11/03 (日) 10:03:55 - Mitoma タンパクX-T2A-dTomatoをmouseにノックインしているのですが、表現型を評価するとdTomatoはしっかり発現しているのですが、免疫染色とWBでのタンパクXの量は明らかにdTomatoと比較すると少ないです。 そこでタンパクXの発現量が本当に少ないのか、それとも分解速度が亢進しているのかを評価するために、肝臓初代培養細胞を使用し、分解速度を調べようと思いますが、分解速度を評価するに最適なタンパク合成阻害薬を教えていただけますでしょうか。

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