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(無題) 削除/引用 No.12643-6 - 2024/10/25 (金) 05:52:34 - おお コラゲナーゼとかで細胞を分散させるのがStraightforwardだと思いますが、コラゲナーゼでもいろいろな細胞表面蛋白を切るんかな？

(無題) 削除/引用 No.12643-5 - 2024/10/25 (金) 05:46:01 - おお そういうプロトコールでも膜が取れるのかとも思ったりもしたのですが、まあ実際に違う組織では取れているようなので。 大事なことは各ステップで顕微鏡などで思ったように細胞や核などが分離されているか、細胞が破砕されているかなど確認することと、すべてのフラクション（捨てるところも含めて）をキープしておいてどこにったか確認できるようにする事だとおもいます。それで対処方法も見つけやすくなります。 凍結すると細胞が壊れてしまってわけがわからなくなりそうです。

(無題) 削除/引用 No.12643-4 - 2024/10/25 (金) 05:07:45 - あの 粉砕効率を上げる方法には、マイクロチューブ内で使うペッスルもあります。各社から出ていますが次のようなもの 　　https://watson.co.jp/product/tube/mt-option/ 電動のペッスルを動かす道具が必要ですが、約一万円です。 それから、マイクロチューブの中に、小さな外科用ハサミを突っ込んで、ガチャガチャ切るというのも単純ですが有効です。使用後には錆びないように洗えばハサミは再使用できます。外科用でも、一番安いのは千円未満で買えると思います。

(無題) 削除/引用 No.12643-3 - 2024/10/24 (木) 18:05:35 - qq 「ピペットなどで粉砕」が想像できなかったのですが、ホモジナイザーか粉砕ミルを使うほうがいいんじゃないでしょうか？ 逆質問で申し訳ないですが、 １）脂肪組織以外の夾雑物は、４，６の沈殿に来ると考えていますか？ ２）脂肪組織の膜タンパク質以外は、どこに来ると考えているのでしょうか？ ３）もしかして４，６の上清は、沈殿の誤記でしょうか？もしくは浮遊パック（？）のようなものを上清と言っているのでしょうか？

脂肪組織からの膜タンパク抽出 削除/引用 No.12643-1 - 2024/10/24 (木) 07:53:00 - １２３ お世話になっております。 以下のプロトコルで脂肪組織から膜タンパク抽出を試みましたが、濃度が限りなく0に近い数値でした。肝臓など他の組織では成功しているプロトコルです。 1. 200mgの脂肪組織 2. 組織を0.1% NP40バッファーに入れて、ピペットなどで粉砕 (肝臓よりも粉砕されていなかったです） 3. 1000Gで15min 遠心 4. 上清を0% NP40バッファーに入れて、ピペットなどで粉砕 5. 1000Gで15min 遠心 6. 上清を1% NP40バッファーに入れて、ピペットなどで粉砕 7. 1時間 4Cの部屋でローテーション 8. 16000Gで15min 遠心 9. 上清を回収し、膜タンパクとする。 2の前にすり鉢にてLiquid Nitrogenによる凍結＆粉砕が有効でしょうか？ すり鉢による凍結＆粉砕は回収量が軒並み低くなるのであまり好みではないのです。しかし、脂肪組織の粉砕が難しいのが、細胞膜を回収できていない原因だと考えていおり、凍結＆粉砕が有効なのかと考えています。

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