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(無題) 削除/引用 No.12642-9 - 2024/10/30 (水) 07:25:12 - おお >[Re:8] KWIさんは書きました : > おおさん > > GFPポジのものをソートするため、ソート後、もしくはその翌日にシングルかどうかは確認できますが、蛍光がなければフィーダーと区別できないため不可能ではあります。 > ありがとうございます。色々と考えるべきパラメーターがはっきりしてきました。

(無題) 削除/引用 No.12642-8 - 2024/10/26 (土) 09:02:36 - KWI おおさん GFPポジのものをソートするため、ソート後、もしくはその翌日にシングルかどうかは確認できますが、蛍光がなければフィーダーと区別できないため不可能ではあります。 >[Re:6] おおさんは書きました : > >[Re:3] KWIさんは書きました : > > シングルアイソレーションするならフィーダーは必ず敷いています。 > > その方が確実に増えてきます。し、フィーダーはやがて死んでいなくなります。 > > デフォルトでやっているという方もいると言う事で情報として役に立つなあと思いました。 > > フィーダーを敷いていて、１ウェルに１つ細胞が入っているというのが確実に目視できますでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.12642-7 - 2024/10/26 (土) 01:13:36 - おお いまちょっと思いついているのは、分離したい細胞の親株とかで抗生物質を利用してあとで殺せる細胞を先に撒いておくとかでもいいのかもとか思い始めてます。どこまでうまく行くのかわかりません。 またヒト正常繊維が細胞ならコンタクトインヒビッションがかかるのでマイトマイシンや放射線せずとも増えて困ることはないし、単離する細胞が何らかの抗生物質耐性マーカーが入っていたら要がなくなればそれで選択したらいいのかなぁと思い始めてますが、、、 MEFを処理して引くよりズボラなやり方も模索し始めました。。。

(無題) 削除/引用 No.12642-6 - 2024/10/26 (土) 01:05:45 - おお >[Re:3] KWIさんは書きました : > シングルアイソレーションするならフィーダーは必ず敷いています。 > その方が確実に増えてきます。し、フィーダーはやがて死んでいなくなります。 デフォルトでやっているという方もいると言う事で情報として役に立つなあと思いました。 フィーダーを敷いていて、１ウェルに１つ細胞が入っているというのが確実に目視できますでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.12642-5 - 2024/10/25 (金) 07:44:55 - おお >[Re:4] あのさんは書きました : > 培養液の一部に、使用済の培養液を入れると良いかも。オートクライン、パラクライン的な要素の補填が必要な場合ですが。 そのようにしてはいるんですけどね。

(無題) 削除/引用 No.12642-4 - 2024/10/25 (金) 04:52:19 - あの 培養液の一部に、使用済の培養液を入れると良いかも。オートクライン、パラクライン的な要素の補填が必要な場合ですが。

(無題) 削除/引用 No.12642-3 - 2024/10/24 (木) 23:12:50 - KWI シングルアイソレーションするならフィーダーは必ず敷いています。 その方が確実に増えてきます。し、フィーダーはやがて死んでいなくなります。 同僚がフィーダーを使わずシングルアイソレーションしていますが、3週間待ってコロニー生えませんでした、もう一度同じこと繰り返します、と言ってるのを聞いて、確実性のある方法でなぜやらないのだろうと疑問に思っていました。

(無題) 削除/引用 No.12642-2 - 2024/10/24 (木) 18:03:33 - あ 確実でも、とりあえずざっくりのsingleクローン単離でも、ウエルに入るのは１細胞だからフィーダー不要じゃないですか？

フィーダー 削除/引用 No.12642-1 - 2024/10/24 (木) 03:22:52 - おお 例えばよく使われる比較的容易に増える細胞株（がん細胞がたいていと思いますが、プライマリーなどのファイブろとかもかな）で確実なSingle Cloneが拾いたいとき、９６Wellとかに１つぐらいになるように細胞をまくことがありますが、そういうときフィーダーCellを使ったことがありますか？ ちょっと興味本位な質問です。HEKとかHelaとかでもいいです。

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