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IgM抗体とProteinGビーズを使った細胞分離 トピック削除
No.12634-TOPIC - 2024/10/21 (月) 20:43:51 - えいせい
お世話になります。

現在、とある組織から特定の細胞を分離したのちRNA-seqをかける実験を計画しています。

その細胞種を染め分けれる抗体が限られており、保有している抗体のアイソタイプがIgMです。細胞分離に使用可能なProtein Gビーズは保有していますが、ご承知の通りProtein GとIgMは結合しません。


このような場合、
•Anti-xx antibody (IgM)
•Anti-IgM antibody (2nd antibody)
•Protein Gビーズ
で細胞分離って可能でしょうか。

原理的に考えれば可能なのでしょうが、あまり事例を見たことがなくて少し不安になってしまってます。

IgM用のdynabeadsを買えよ。とか、持っているIgMを標識してからビーズに結合させろよ。というツッコミは重々承知の上で、皆さんのご意見を賜りたいと思ってます。

よろしくお願いいたします。
　
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No.12634-8 - 2024/10/22 (火) 15:04:36 - えいせい
おお様

ありがとうございます。やはり、スモールスケールで実際にやってみることが大切ですよね。

(無題) 削除/引用
No.12634-7 - 2024/10/22 (火) 14:12:31 - おお
因みにanti-IgG(L+H)ならIgM を認識するよ。L鎖は共通しているから。L鎖特異的なものもあるし。

質問の件ワークしそうですが、個々の事例でどうかは別の話。小スケールで確認するといいんじゃないかな。

(無題) 削除/引用
No.12634-6 - 2024/10/22 (火) 13:55:15 - えいせい
toto様

ありがとうございます。toto様のご体験を聞いて、やはり、問題なくワークしそうだなと自信を持てました。

大変参考になしました。

(無題) 削除/引用
No.12634-5 - 2024/10/22 (火) 10:56:50 - toto
細胞の分画ではやったことないしIgMでもないですが、IPなどで間にもう一つの抗体を挟んでやったことは何回かあります。また、免染でも種のｷ合で間に繋ぐ抗体を挟むことは今でもやります。もちろん、その間に挟む抗体の質に寄るのでしょうが、割とあっさりうまくいきます。バックがあがるとはあまり感じませんでした。

(無題) 削除/引用
No.12634-4 - 2024/10/22 (火) 08:50:47 - えいせい
あの様

ありがとうございます。はい。DynabeadsにIgM用の製品があることは承知しているのですが、コスト面で難しく、なんとかProteinGビーズで細胞分離できないかな、というご相談でした。

いちばんスマートな解決策はあの様がご提示していただいた、IgM用のDynabeadsを使用することだと思っています。

(無題) 削除/引用
No.12634-3 - 2024/10/21 (月) 23:07:16 - あの
次の情報は役にたちませんか？
　https://www.veritastk.co.jp/products/reference/faq/Faq2_217.html

(無題) 削除/引用
No.12634-2 - 2024/10/21 (月) 20:50:51 - えいせい
すいません。文字化けしてますね


Anti-xx antibody (IgM) この抗体が目的細胞を認識する。
Anti-IgM antibody (2nd antibody)
Protein Gビーズ

これらを組み合わせて細胞分離が可能かどうかという問いでした。

よろしくお願いします。

IgM抗体とProteinGビーズを使った細胞分離 削除/引用
No.12634-1 - 2024/10/21 (月) 20:43:51 - えいせい
お世話になります。

現在、とある組織から特定の細胞を分離したのちRNA-seqをかける実験を計画しています。

その細胞種を染め分けれる抗体が限られており、保有している抗体のアイソタイプがIgMです。細胞分離に使用可能なProtein Gビーズは保有していますが、ご承知の通りProtein GとIgMは結合しません。


このような場合、
•Anti-xx antibody (IgM)
•Anti-IgM antibody (2nd antibody)
•Protein Gビーズ
で細胞分離って可能でしょうか。

原理的に考えれば可能なのでしょうが、あまり事例を見たことがなくて少し不安になってしまってます。

IgM用のdynabeadsを買えよ。とか、持っているIgMを標識してからビーズに結合させろよ。というツッコミは重々承知の上で、皆さんのご意見を賜りたいと思ってます。

よろしくお願いいたします。
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