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DTRマウスに対するジフテリアトキシンへの反応性 トピック削除
No.12622-TOPIC - 2024/10/15 (火) 02:17:10 - Noddy
現在CD11b-DTRマウスに対してジフテリアトキシン(以下DT)をi.p.投与してCD11b陽性細胞をdepletion(枯渇)させようとしています。
はじめ10ng/g bodyの投与でうまくdepletionできていましたが、数カ月後にDepletionがうまくいかなくなりました。マウスのせいかと思い、改めてJAXから購入し、Ear tag管理していましたが、depletion不良だったため薬剤を購入し直しました。初回投与はうまく行きましたが、その後depletionがgoodなものとbadなものが出てきました。個体によって反応性が違うのかと思っていましたが、他のラボからもらったDTをbad responderに使うと、今後はdepletionがうまくいきました。
今回の結果は薬剤のDTが原因と考えられますが、なぜこうなったのかわかりません。
どなたか同じような経験がある方はいらっしゃいますか?

ちなみに、保管方法は1mgを1mlのmQで希釈して、1mg/ml→100ug/ml→1ug/100ulに希釈して-20℃で保管し、使用時にさらに1ug/500ulに希釈して使用していました。
 
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(無題) 削除/引用
No.12622-4 - 2024/10/17 (木) 03:49:35 - おお
>1ug/500ulなら200倍希釈ですし

いや50倍か、、、

(無題) 削除/引用
No.12622-3 - 2024/10/17 (木) 03:46:25 - おお
あとメーカーに問い合わせておいたほうがいいかもしれません。

もう一つ加えるとすると、微量になるとチューブやチップへの吸着によるロスが顕著になってくると一般的に言われてます。どれくらいの濃度というのはなんとも言えないですが、Low binding tipsとかシリコナイズされたチューブを使ったほうがいいかもしれません。ストックは1mg/mlか100ug/mlぐらいでしておいて必要時には適切な濃度のものを要事調製するようにしたほうがいいかもしれません100ug/mlから1ug/500ulなら200倍希釈ですし直接最終濃度に希釈してもなんとかなるのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.12622-2 - 2024/10/16 (水) 07:16:56 - おお
>他のラボからもらったDTを

同じ商品のものでしょうか?違うならそのラボと同じものを使うというのも(保証はできないけど)やり方かと。同じものであれば調製のしかた(何に溶かして、どのように保存するかなど)が一緒か確認したでしょうか。

DTRマウスに対するジフテリアトキシンへの反応性 削除/引用
No.12622-1 - 2024/10/15 (火) 02:17:10 - Noddy
現在CD11b-DTRマウスに対してジフテリアトキシン(以下DT)をi.p.投与してCD11b陽性細胞をdepletion(枯渇)させようとしています。
はじめ10ng/g bodyの投与でうまくdepletionできていましたが、数カ月後にDepletionがうまくいかなくなりました。マウスのせいかと思い、改めてJAXから購入し、Ear tag管理していましたが、depletion不良だったため薬剤を購入し直しました。初回投与はうまく行きましたが、その後depletionがgoodなものとbadなものが出てきました。個体によって反応性が違うのかと思っていましたが、他のラボからもらったDTをbad responderに使うと、今後はdepletionがうまくいきました。
今回の結果は薬剤のDTが原因と考えられますが、なぜこうなったのかわかりません。
どなたか同じような経験がある方はいらっしゃいますか?

ちなみに、保管方法は1mgを1mlのmQで希釈して、1mg/ml→100ug/ml→1ug/100ulに希釈して-20℃で保管し、使用時にさらに1ug/500ulに希釈して使用していました。

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