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(無題) 削除/引用 No.12621-3 - 2024/10/14 (月) 22:11:56 - しろろ >[Re:2] G25さんは書きました : とても丁寧な説明いただきありがとうございます！よく理解できました！

(無題) 削除/引用 No.12621-2 - 2024/10/14 (月) 18:44:11 - G25 破砕液100 mg/1100 uL(組織の比重1として体積100 uL + DW 1000 uL)から 440 uLを測定に回している。 440 uL中に含まれるTG量を1100 uLあたり、すなわち組織100 mgあたりに換算するため2.5(1100 uL/440 uL)をかけている。さらに10をかけて1 gあたりに換算。 1.667をかけているのは、破砕液440 uL にC/M 1100 uL加えて相分離すると、有機層の体積が約667 uLになると言うことなんでしょう。有機層400 uLを測定に供しているので、全量 667 uLに換算するため1.667をかける。これはあらかじめ予備実験で求められた係数であって、それに携わっていない私たちは黙って従うしかない。 ちなみに0.1をかけているのは、mg/mLで出力された測定値から最終的な分散液100 uL中のTG量を算出するため。 TG濃度x0.1 = 脂質分散液 100 uL中のTG量 脂質分散液 100 uL中のTG量 = 有機層400 uL中のTG量 有機層400 uL中のTG量 x1.667 = 有機層全量に含まれるTG量 有機層全量に含まれるTG量 = ホモジネート 440 uLに含まれるTG量 ホモジネート 440 uLに含まれるTG量 x 2.5 =ホモジネート1100 uLに含まれるTG量 ホモジネート1100 uLに含まれるTG量 =組織 100 mgあたりのTG量 組織 100 mgあたりのTG量 x 10 = 組織 1 gあたりのTG量

肝臓組織中の脂肪定量計算方法について 削除/引用 No.12621-1 - 2024/10/14 (月) 15:34:40 - しろろ 以下の手順で肝臓組織中の脂肪量を測定したいのですが、計算方法がよくわかりません。1.667や2.5という数字はどこから現れたのでしょうか。教えていただけると幸いです。 手順 2mlチューブの重さを電子天秤で測り、0合わせしておく 2mチューブに肝臓片100mg程度（50-120mg）を入れて、重さを計測 10倍量のDWと破砕ビーズを加える. (組織100mgの場合、DWを1000ul加える) 3分間破砕装置でビーズ破砕する 新しい2mlチューブに破砕液を440ul, メタノール・クロロホルム溶液(1:2)を1100ul加える ボルテックス 15,000xg 5分遠心 下層の有機層（クロロホルム）400ulを新しい1.5mlチューブに分注 80℃のピートブロック上で10-15分乾燥→粘性のある脂質だけ残る イソプロパノール or 5% BSA/PBS-T0.05% 100ulで溶解→超音波で分散(10min) 解析まで-20℃保存するが解析前に再度超音波で分散 TG測定kitなどで測定する。和光製のTG測定kitではサンプル10ul+マスターmix100ulとして、96well plateで測定を行う。 上記実験をおこなった場合の組織1g当たりのTG(トリグリセリド) 量の簡易版換算式の例 　　　測定したTG濃度(mg/ml) x 0.1 x 1.667 x 2.5 x 10 = TG mg/1g tissue

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