培地やPBS washを完全に取り除いてからPFAを入れるのではなく、
残しておいて、そこにPFAを少しずつ加えていく。例えば0.5 mL残しておいたところに4% PFAを0.5 mL徐々に加えるとか。要は固定液を加えるときに物理的にも生理的にも急激なショックを避けるため。1/2に薄まって2% PFAになってしまうけれど多くの場合、その濃度で十分。やっぱり4%にしたいというのなら、そこで4% PFAに液換え。
培地によっては(というか多くの培地は)PFAを入れると血清成分なんかが析出するので、PBSに置換したところに4% PFA/PBSを入れていくのが安全でしょう。 |
|