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細胞の固定 トピック削除
No.12610-TOPIC - 2024/10/07 (月) 08:38:05 - s
チャンバースライドなどで細胞染色を行うときに、
細胞によってはホルムアルデヒドの固定の段階で剥がれやすいものがあります。
その場合はどうしておられますか?
 
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No.12610-5 - 2024/10/08 (火) 03:36:37 - mont
培養する前に、スライドをFibronectin、Poly-L-Ornithine、ゼラチンとか、お使いの細胞に適したコーティングをしていますか?

プラスティックの培養ディッシュにはよく張り付くけど、ガラスだと剥がれやすい、、、という培養細胞は多いです。

(無題) 削除/引用
No.12610-4 - 2024/10/08 (火) 01:03:37 - s
ありがとうございます。
ご指摘の方法で試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.12610-3 - 2024/10/07 (月) 16:02:53 - G25
培地やPBS washを完全に取り除いてからPFAを入れるのではなく、
残しておいて、そこにPFAを少しずつ加えていく。例えば0.5 mL残しておいたところに4% PFAを0.5 mL徐々に加えるとか。要は固定液を加えるときに物理的にも生理的にも急激なショックを避けるため。1/2に薄まって2% PFAになってしまうけれど多くの場合、その濃度で十分。やっぱり4%にしたいというのなら、そこで4% PFAに液換え。

培地によっては(というか多くの培地は)PFAを入れると血清成分なんかが析出するので、PBSに置換したところに4% PFA/PBSを入れていくのが安全でしょう。

(無題) 削除/引用
No.12610-2 - 2024/10/07 (月) 15:27:39 - 1
液流が細胞に直接当たらないように注意しながら、壁に伝わらせるようにしてなるべく静かに入れたらどうでしょうか。

細胞の固定 削除/引用
No.12610-1 - 2024/10/07 (月) 08:38:05 - s
チャンバースライドなどで細胞染色を行うときに、
細胞によってはホルムアルデヒドの固定の段階で剥がれやすいものがあります。
その場合はどうしておられますか?

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