Bio Technical フォーラム

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コラゲナーゼ処理した細胞の発現プロファイル トピック削除
No.12599-TOPIC - 2024/09/29 (日) 21:37:31 - だにお
GFPを発現する細胞を含む組織をコラゲナーゼでシングル化し,FACSで分取してRNA-Seqを行ったのですが,どうも発現プロファイルがおかしい気がしています(本来発現してなさそうなgeneも高発現しています)

コラゲナーゼ処理が3-4時間と長すぎたのが原因かと思っています

トランスクリプトーム解析で,発現プロファイルが異常であるor異常であるとはいえないことを調べるための方法などありますでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.12599-2 - 2024/09/30 (月) 09:19:21 - あの
当方で細胞培養用にコラゲナーゼ処理するときは30から40分です。

明らかに長すぎますね。

死細胞を除去していたとしても、その時間なら遺伝子発現に十分に影響する時間です。

コラゲナーゼ処理した細胞の発現プロファイル 削除/引用
No.12599-1 - 2024/09/29 (日) 21:37:31 - だにお
GFPを発現する細胞を含む組織をコラゲナーゼでシングル化し,FACSで分取してRNA-Seqを行ったのですが,どうも発現プロファイルがおかしい気がしています(本来発現してなさそうなgeneも高発現しています)

コラゲナーゼ処理が3-4時間と長すぎたのが原因かと思っています

トランスクリプトーム解析で,発現プロファイルが異常であるor異常であるとはいえないことを調べるための方法などありますでしょうか?

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