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matrigelコートがうまくいきません トピック削除
No.12589-TOPIC - 2024/09/24 (火) 14:04:24 - るて
iPSCの神経分化をしようとしています。
corningのmatrigel(354234)300㎕をDMEM-F12 25mlに溶かして調整し、室温で1時間おきコーティングしています。
12well plate 1wellにつき500㎕使用しています。
2.0*10^5cell/㎠の細胞数を撒いているのですが、小さな円状に細胞が接着しない場所ができてしまいます。
12well plate 1wellにつき1000㎕使用しても変化がないのですがmatrigelの調整ミスなのでしょうか。

改善点を思いついた方がいらっしゃいましたら、大変恐縮ですがご教示いただけますと幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.12589-2 - 2024/10/01 (火) 00:31:10 - ふらいむ
0.3/25mlで83倍希釈、若干薄めな気がします。
20倍、40倍希釈も検討してみてください。
コート時間ももう少し長めに室温3時間程度置いても大丈夫です。
細胞が接着しない場所がウェルの中心部なら
液量を増やす必要があると思いますが、
そうでないならば現在の液量で問題ないと思います。

データシートは読んでらっしゃると思いますが、
マトリゲルは温度が上がるとゲル化するのが
取扱い上めんどくさい点でして、コーティングのムラの原因になります。
原液は4℃で1晩かけて解凍し、
コーティングするプレート、チップ、希釈する培地、
希釈液を作成するチューブ等、すべて冷やしておいてから作業してください。

matrigelコートがうまくいきません 削除/引用
No.12589-1 - 2024/09/24 (火) 14:04:24 - るて
iPSCの神経分化をしようとしています。
corningのmatrigel(354234)300㎕をDMEM-F12 25mlに溶かして調整し、室温で1時間おきコーティングしています。
12well plate 1wellにつき500㎕使用しています。
2.0*10^5cell/㎠の細胞数を撒いているのですが、小さな円状に細胞が接着しない場所ができてしまいます。
12well plate 1wellにつき1000㎕使用しても変化がないのですがmatrigelの調整ミスなのでしょうか。

改善点を思いついた方がいらっしゃいましたら、大変恐縮ですがご教示いただけますと幸いです。

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