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(無題) 削除/引用 No.12580-7 - 2024/09/20 (金) 21:10:49 - あの 誤字ありました 　誤　超波長 　正　長波長

(無題) 削除/引用 No.12580-6 - 2024/09/20 (金) 19:46:59 - あの Alexa の超波長領域なら、カメラの性能も高い必要があるし、ソフトもそれなりである必要があるけど、そのあたりは大丈夫ですか？

(無題) 削除/引用 No.12580-5 - 2024/09/20 (金) 19:41:14 - SN フラッシュライトはこんな感じのです。 https://nightsea.com/products/dfp/ ただ、蛍光顕微鏡下でGFPの確認されているなら染色の問題ですね。 私が使っているGFP抗体はInvitrogen A11122で、二次抗体はanti rabbit IgG Alex488を使っています。一応確認ですが、alexa660の蛍光は目視ではなくカメラ下で確認されてますよね？

(無題) 削除/引用 No.12580-4 - 2024/09/20 (金) 18:18:57 - あああ SN様 フラッシュライトでのGFP確認の方法を知らないため、もしよろしければ教えていただけないでしょうか？ GFPの確認は蛍光顕微鏡でGFP蛍光を観察して、GFPが発現していることは確認しています。 一次抗体はBiossのGFP Polyclonal antibodyを、二次抗体はAlexa 660を使用しています。

(無題) 削除/引用 No.12580-3 - 2024/09/20 (金) 09:27:49 - toto 組織でGFP自体の蛍光が見えないのならば、培養細胞にGFPを発現して、PFA固定でその抗体を用いて染色できることも確認しましょう。マウスでプラン通り発現してるとしても、GFP融合タンパクのターンオーバーがものすごく早くて融合タンパク量が見えない、ということもあります。

(無題) 削除/引用 No.12580-2 - 2024/09/20 (金) 01:11:35 - SN ポジコンとして使っている組織が本当にGFPを発現しているか、フラッシュライトなど他の方法で確認していますか？ GFPの発現が確認されていて、免疫染色でのみうまくいかないのであれば抗体の問題である気がします。使っている抗体は開示できますか？

免疫染色で染まらない問題について 削除/引用 No.12580-1 - 2024/09/19 (木) 18:08:50 - あああ お世話になっています。 免疫染色がうまくいかず行き詰まっているため質問させていただきます。 現在GFP融合タンパク質を発現するTGマウスを用いて、anti-GFPの蛍光免疫染色を行っています。 GFP融合タンパク質を確実に発現している箇所をポジコンとしてまずanti-GFPでの染色条件を確立させてから他の箇所で免疫染色を行おうとしているのですが、ポジコンである箇所でGFPを染色できません。 anti-GFP以外の抗体を使用して免疫染色を行うときれいに染色することができました。 賦活化など行ってみたのですが、染色できませんでした。 他にどのようなアプローチ方法があるかご存知でしたら教えてください。 よろしくお願いします。 固定条件 4%PFAで環流固定後、1h再固定 （凍結切片） 賦活化なしで免疫染色 賦活化(10mMクエン酸で煮沸10min)

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