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(無題) 削除/引用 No.12572-3 - 2024/09/20 (金) 21:56:47 - けん NEBcloning, infusion, SLiCEの経験がありますが、効率は大幅に落ちるもののちゃんと取れる印象です。 だいたい20コロニーくらい拾って数個取れるとかでした。 ベクターのクオリティを上げて(Digestion時間の検討や、BAP処理など)、空ベクターが生き残れないようにするともうちょっと良くなるかも？ それとも1000bpのインサートが入ってるとのことでしたら、一度それを読んで何が入っているのかを確かめるのも手だと思います。

(無題) 削除/引用 No.12572-2 - 2024/09/16 (月) 01:05:25 - 独り言 インサート2つのgibsonもちょいちょいますが、ほとんどできてます。 まれにできないのは、全く入らないようなものです。 1本だけ、もしくはPCR産物が中途半端にはいることはありません。原理的には普通はそうならないはず。 コロニー数は、テンプレートのみより、多くできているのでしょうか？ 詳細はわからないので、なんとも言えませんが、リピート配列があったりするのでしょうか。

Gibson assembly 削除/引用 No.12572-1 - 2024/09/15 (日) 13:03:26 - en Gibson assemblyでインサート2つをベクターに挿入する試みをしています。 しかし、PCR productの濃度を変えてもベクターのテンプレートのみを拾ってしまいます (1500 bpほど2つが入り、3000 bpのインサートのはずなのに1000 bpばかり) もし皆様の中で同じ状況の経験がありましたら、ご教示いただきたいです。

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