下記のprotocolでギムザ染色を実施しています。
1.標本スライドを作成後、70℃オーバーナイト(15hぐらい)or 80℃1〜2時間でハード
ニングを行う(80℃なら1.5hぐらいで十分)
2.コプリンジャーに0.025%トリプシン溶液、10%FBS/PBS、5%FBS/PBS、ギムザ溶液(
2個)を用意する
3.トリプシン溶液に20〜35秒浸す(32秒がいい感じ)
4.10%FBS/PBSに浸漬して洗う
5.5%FBS/PBSに浸漬して洗う
6.ギムザ液に浸漬して洗う
7.ギムザ液に7分〜10分浸す(7分だと薄いか、10分でも大丈夫だった)
8.DWで洗う
9.ドライヤーなどで急速に乾燥させる(なければインキュベーターを60℃くらいにす
るとよい)
10.撮影
染色体が白抜けしてしまいましたが、原因がわかる方いらっしゃいますでしょうか? |
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