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(無題) 削除/引用 No.12526-9 - 2024/08/23 (金) 11:02:32 - LPS 抗体の節約というよりも、手間、場所を考えて伺いました。同じ抗体で、行うことが多いので。

(無題) 削除/引用 No.12526-8 - 2024/08/23 (金) 01:25:11 - おお 今更のレスですが、２枚同じ容器に入れて検出したことはあります。しかしながらどうもシグナルの出具合など違うようで（感覚的ではありますが）、最初は上下入れ替えたりとか色々やってたのですがそれはそれで面倒なのでやらなくなりました。 節約という意味ではどなたかすでに指摘がありますが、少量を膜の上にたらして、うえからパラフィルムを置くのがよろしいかと。あるいはHybridization bagに封入するとか。

(無題) 削除/引用 No.12526-7 - 2024/08/21 (水) 11:34:48 - ねずみ ウエスタンで背中合わせでハイブリバッグに入れて処理したらもう一方の膜にタンパクがわずかに移った経験があるので、それ以降重ねないようにしています。サザンの経験は少ししかないですが移ったことはないです。タンパクは膜から離れやすいのかもしれないと思っています。

(無題) 削除/引用 No.12526-6 - 2024/08/21 (水) 10:09:36 - LPS とりあえずは、深い理由はないということで理解しました。 節約術もありがとうございました。当方はローラーボトルで一次反応をやっています。タッパーで振盪するよりは少なく済んではいますが、ローラーが小さいので、枚数は稼げないです。

(無題) 削除/引用 No.12526-5 - 2024/08/20 (火) 19:28:31 - 774R 小技ですが、ロール巻きから切り出したメンブレンは曲がり癖が付いてることが多いと思いますが、その場合、凸と凸、凹と凹が重なり合うようにすると張り付きが抑えられて良いです。 とにかく抗体を節約したいという場合は、パラフィルムの上に少量の抗体溶液を載せて、その上にメンブレンを重ねる方法があります。乾燥を防ぐため密閉容器に入れ、隙間に湿らせた濾紙などを置くと良いです。

(無題) 削除/引用 No.12526-4 - 2024/08/20 (火) 18:29:34 - RA ２枚くらいまでならばできることはできます。ただタッパーのサイズが膜のそれよりも十分に大きいことが必要です。液量も、振盪して膜がタッパー全体に自由に動くくらい十分量必要です。時々見て、膜同士がくっついたまま動かない様子とがみられたら、明らかにタッパーサイズが足りないか液量の不足で、洗浄や反応の不均一が起こり良い結果は期待できません。 大切なデータならば、やむを得ない事情がある時以外は、１タッパー１枚でやった方がいいです。 一次抗体の節約で、ということならば、今はハイブリバックなどを利用した方法など、汎用されているよう方法がいくつかあります。

(無題) 削除/引用 No.12526-3 - 2024/08/20 (火) 17:30:26 - G25 膜が泳いで膜同士が密着しないだけの液量がほしいところですが、 抗体が貴重なことが多く、節約のためあまり液量を増やせないからじゃないでしょうか。 核酸プローブなら安価になんぼでも増やせますが、抗体はそうはいかない。

(無題) 削除/引用 No.12526-2 - 2024/08/20 (火) 09:06:10 - 774R 結論から言うと、十分な液量を使えば全く問題ありません。 ただし、むらなく液が行き渡るためには相応の液量が必要です。動かした時に、膜と膜の間に空間が出来て貼り付かないように気を付けると、枚数と液量はほぼ比例関係になるので、抗体の節約にはならないです。

ウェスタンの膜　何枚？ 削除/引用 No.12526-1 - 2024/08/20 (火) 03:51:31 - LPS 昔、サザンとかでライブラリーのスクリーニングをされた方ならわかると思いますが、一つの容器に、膜を１０枚とか重ねてハイブリをやられていたと思います。 それでも、シグナルに問題があった経験はありません。 でも、ウェスタンでは、聞いたことがありません。何か問題があるのでしょうか？ ご存じないですか。

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