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(無題) 削除/引用 No.12493-3 - 2024/08/07 (水) 13:48:04 - うの おお様 ご返信ありがとうございます。 この実験には基本的にpuromycinを投与していない個体をReference sampleとしてウエスタンブロットに流します。 二次抗体はIgG2a FCγを使うことによってIgG H+Lで生じるノンスぺバンドを焼失させることが可能です。 現在、個体によってはref sampleと同レベルでwhole bandsが確認できないものが生じている=puromycinが入っていない(これは私の腹腔注射の手技が悪かった可能性もあります)ということになります。 また、内部標準(同一個体の別組織)も同時に流していますが、そちらもバンドが視認できませんので、おそらく取り込まれていないのかと思います。 いいかどうかに関してはわかりませんよね・・・ とりあえず、作図して載せてみてreviewerの判断に任せようと思います

(無題) 削除/引用 No.12493-2 - 2024/08/07 (水) 08:47:27 - おお いいかどうかは実験の詳細がわからないのでなんとも言えません。 取り込まれていない個体といいますが、puromycinは取り込まれていて蛋白合成は低いので検出できなかったなら全部含めるべきというふうになってしまいませんか？

Surface sensing of translation 削除/引用 No.12493-1 - 2024/08/06 (火) 18:04:36 - うの 皆様、いつも大変勉強をさせていただいております。 今回は掲題のSurface sensing of translationについての質問があります。 この方法はSUnSET法ともいい、in vivoであればpuromycinを腹腔内投与することで合成中タンパク質にpuromycinをラベルしてタンパク合成を測る方法です。 今回細胞内のタンパク合成をこのSUnSET法でラベルしているのですが、puromycinが取り込まれている個体と取り込まれていない個体がいるようです。 とくに実験対照ではn=5のうち4は取り込まれていましたが、実験群ではn=5のうち2しかラベルタンパクが確認できませんでした。 方法は一般的なウエスタンブロットです。 これ以上、n=2(あくまでラベルタンパクは2ということで、ほかの因子はn=5)で報告をしてもよいものでしょうか・・・ 単に実験を追加しろと言われるかもしれませんが、現在の職場でこれ以上実験を追加するのが難しいので困り果てている状態です。 お知恵を拝借できれば幸いです。

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