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(無題) 削除/引用 No.12492-4 - 2024/08/08 (木) 23:23:35 - SYBR master >[Re:1] akibooooooさんは書きました : > ご存じの方がおられましたら教えていただけませんでしょうか？ > Oligo合成をTのみ20merつなげたものを使っている方はおられませんでしょうか？ きみ、今年の6月にも同じような質問(No.12399-TOPIC - 2024/06/25 (火) 18:19:25)してるよね？あのときの回答を参考にすれば、容易に答え出ると思うんだけど？

(無題) 削除/引用 No.12492-3 - 2024/08/06 (火) 23:18:29 - おお まずリン酸化については次に直接PCRをするなら関係ありません。１８がいいか２０がいいかについてはどっちじゃないとだめということはないと思います。もちろん比較すると何らかの差が出る可能性は否定できませんけど。 私は昔誰かが大量に買い込んだと思われるカスタムオリゴで合成したOligodT(18)を使ってます。もしそれが２０merでも気にせず使っていたと思います。なので「Oligo合成をTのみ20merつなげたも」でいいと思います。

(無題) 削除/引用 No.12492-2 - 2024/08/06 (火) 18:12:30 - G25 逆転写反応を低めの温度で短時間->温度を上げて終わりまで、いいように思います。 SuperScriptで短鎖、低Tmのランダムプライマーを使う時、そうしろと書いてますので。 もっとも、もともとdT20とdT18でそんなに違いはないんじゃないかな。 そもそも言ってることが本当かしら？と思う。 アダプター付加やライブラリー作成など、ダウンストリームで必要な理由がなければプライマーのリン酸化は必要ないでしょう。

OligodT 削除/引用 No.12492-1 - 2024/08/06 (火) 17:56:14 - akiboooooo 逆転写する際に用いるOligodTですが、ThermofisherのSuperScriptを使う場合、逆転写の温度が高いので、OligodT18merではなく、OligodT20merを使う必要があるようです。 OligodT(20mer)を購入すると31500円と高価です。 Oligoを注文すれば1000円以内で作れます。 しかし、売られているものをよく見ると5’がリン酸基で修飾されているようです。 質問ですが、OligodT20merでは逆転写はできませんか？ リン酸基がついていないとまずいでしょうか？ OligodTは逆転写には使いますが、RT-PCRには遺伝子スペーシフィックなPrimerを用います。 ご存じの方がおられましたら教えていただけませんでしょうか？ Oligo合成をTのみ20merつなげたものを使っている方はおられませんでしょうか？ よろしくお願いいたします。

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