Bio Technical フォーラム

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PCRの反応液に色がついているのですがその色素は何ですか? トピック削除
No.12488-TOPIC - 2024/08/02 (金) 13:44:40 - akiboooooo
Toyobo社の
KOD One® PCR Master Mix -Blue- (Dye-containing 2×PCR Master Mix)
は青い色がついていて、PCRをするとそのまま電気泳動ができます。
この色素は何なのでしょうか?ご存じの方がおられましたら教えていただけませんでしょうか?
また、Glycerolみたいな比重を重くするものも入っているのでしょうか?
色のない反応液に入れて同じことをしたいと思っています。
よろしくお願いいたします。
 
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ありがとうございました。 削除/引用
No.12488-5 - 2024/08/06 (火) 17:51:00 - akiboooooo
助かりました。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.12488-4 - 2024/08/02 (金) 18:48:46 - G25
BPBを使うとして注意点。
BPBのストック溶液は水ではなくpH8くらいのTrisバッファーなどに溶かすこと。BPB自体が弱酸でpHを上げてやらないと溶けないし、他の溶液に加えたときpHを下げてしまってトラブルのもと。溶液が青くならずに緑〜黄ぽくなったばバッファー不足。

(無題) 削除/引用
No.12488-3 - 2024/08/02 (金) 18:40:41 - G25
昔、私も興味があって調べたことがあって、
宝の特許請求書を見つけました。
https://www.google.com/url?sa=t&source=web&rct=j&opi=89978449&url=https://patentimages.storage.googleapis.com/21/e7/65/b8165057d29050/JP3587284B2.pdf

色素はBPB他、いろいろなものがOKで、比重を高めるのはグリセロール、スクロースなどでも良い(例として)。

最近のPCRバッファーはエンハンサートしてPVAかPVPのようなものが入っていてトロミのあるのが多いですよね(KODとか宝の諸製品とか)。それだったらそのままでも十分に比重が大きいかも。

(無題) 削除/引用
No.12488-2 - 2024/08/02 (金) 15:14:14 - おお
BPB だと思われますが。てか、書いてある
Ready-to-use: 2X premixed solution of UKOD DNA polymerase, buffer, dNTPs, and MgCl2. KOD One PCR Master Mix Blue includes a loading dye (BPB) to allow direct loading onto agarose gels.
https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/kmm201nv

直接ロードできるとも書いてあるので、グリセロールかどうかは置いておいて、水より重くなる様にしてると思う。グリセロールはたのGCリッチ用添加物と似た作用があるので入っている事はメリットでもある。

PCRの反応液に色がついているのですがその色素は何ですか? 削除/引用
No.12488-1 - 2024/08/02 (金) 13:44:40 - akiboooooo
Toyobo社の
KOD One® PCR Master Mix -Blue- (Dye-containing 2×PCR Master Mix)
は青い色がついていて、PCRをするとそのまま電気泳動ができます。
この色素は何なのでしょうか?ご存じの方がおられましたら教えていただけませんでしょうか?
また、Glycerolみたいな比重を重くするものも入っているのでしょうか?
色のない反応液に入れて同じことをしたいと思っています。
よろしくお願いいたします。

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