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(無題) 削除/引用 No.12477-7 - 2024/07/31 (水) 09:18:40 - 　vdfgh ありがとうございます。少容量かつ量価格の高い抗体なものでかなり節約して使用しており、8well chamber slideで0.200ml per wellです。一応反応液が全面を覆うことや湿潤状態にしており蒸発や乾燥ないことは大丈夫です。

(無題) 削除/引用 No.12477-6 - 2024/07/31 (水) 08:31:54 - ねずみ チャンバーを付けた状態で抗体処理していますか？ そうだとして、抗体をケチって液量を少なくしすぎていたりはしないでしょうか？中央付近が乾かないギリギリの状態みたいな。液量を増やすかゆっくりでもいいので液が循環するように揺するなどするともしかしたら中央付近もちゃんと染まるかもしれないと思いました。それか、パラフィルムでカバーするようにして染色するとか。 すでにやっての結果でしたら、無視してください。 ちなみに シグナル：強い、弱い シグナル強度：高い、低い で良いと思いますよ。

(無題) 削除/引用 No.12477-5 - 2024/07/31 (水) 07:39:09 - s すみません、端の方が高いでした

(無題) 削除/引用 No.12477-4 - 2024/07/31 (水) 07:36:54 - s 端の方が中央より蛍光強度が低いことはよくあります。 端の方がうまく抗体が洗い流されなかったり、乾いたりしやすいなどによって抗体が溜まりやすくなっていると思っております。 各々中央部分で評価してみてはどうですか？

(無題) 削除/引用 No.12477-3 - 2024/07/31 (水) 02:00:48 - あの 細胞が剥がれていませんか？

(無題) 削除/引用 No.12477-2 - 2024/07/30 (火) 22:53:37 - G25 散乱とか回折で壁際の光強度が高くなっているのでは？ 散乱回折による光だとバンドパスフィルターを変えても全て光ったりする(特定波長を持つ蛍光ではない)。 測定装置はどんなもの？ 今時のプレートリーダーなら壁際を避けたマルチポイントで測定するね。

Immunofluorescenceの問題 削除/引用 No.12477-1 - 2024/07/30 (火) 21:49:11 - 　vdfgh チャンバースライドでImmunofluorescenceの実験をしています。傾向としてwell の中央に行くほどシグナルがだんだん弱くなり、wellの端のほうがシグナルがものすごい強いのですがなぜなのでしょうか。細胞内局在とかはwellのどこでも同じなのですが、シグナル強度が場所によりかなり違うのです。局在部位やWBの結果から推察して抗体自体には問題はないと思います。

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