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(無題) 削除/引用 No.12476-8 - 2024/08/02 (金) 18:56:58 - VV 返信ができておらず申し訳ございません。 皆さん返信ありがとうございました。 PCR系は絶対的な最適解があるわけではなく、その時その時によって使い分けが大事なようですね。 また反応の安定さについては、そこまで大きな違いもないように思いました。 勉強になりました。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.12476-7 - 2024/07/31 (水) 13:45:26 - G25 爪楊枝が液を吸ってしまうのを避けるため、 私は空の状態のPCRチューブにコロニーを突いた爪楊枝を突っ込んで菌体を底に付け（先を軽く押し付けるだけで十分）、あとからプレミックスを入れている。 全サンプルを拾い終わるまで爪楊枝は入れっぱなしにしておけるので、重複したり飛ばしたりするミスも防げる。

(無題) 削除/引用 No.12476-5 - 2024/07/31 (水) 10:59:34 - 自己流 KODのメーカープロトコルが 50uL total サイクラーは200uL インバースで10kb以上を作る時は50で温度のかかりが悪かったので 半量の25にしてからは基本25uLでまわしてる ただし8連スケールで頻度も低いことから コストより開けた酵素はさっさと使い切ってフレッシュな酵素を使いたいという意味での量 多分、年に5万円分も使い切らない。 コロニーPCRは元々ハズレ込みでのチェックなので MIXを分注して20uL±を適当に。 PCR後にちょっと壁に水滴がつくのと コロニーつつくのに爪楊枝や串など木材使ってるから ちょっと浸み込んで液量減るの見越して15uLよりは下げない 液量減らしてチップで突いても滅菌チップの方が高くつきそう

(無題) 削除/引用 No.12476-4 - 2024/07/31 (水) 10:50:29 - seventh どういう実験系なのかにもよりますねぇ。 定量実験の場合はテンプレートも半量にするとピペット操作の誤差が大きくなるかもですし、逆にテンプレート容量はそのままだと阻害物の持ち込みが相対的に大きくなって効率に影響するかもしれません。 コロニーPCRとかだとあたりを引ければよいので、多少反応失敗するウェルがあっても許容できますし

(無題) 削除/引用 No.12476-3 - 2024/07/31 (水) 00:25:14 - おお https://www.idtdna.com/pages/support/faqs/should-i-use-5-%C2%B5l-or-10-%C2%B5l-reaction-volumes-for-my-rhamp-snp-assays

(無題) 削除/引用 No.12476-2 - 2024/07/30 (火) 22:10:02 - あの PCR装置の指定するウェルサイズによるところが大きいと思います。 当方では、200ulのウェルサイズ指定のABIの装置で、ケチル時には10ulだけにしています。

最適なPCR反応ボリュームについて 削除/引用 No.12476-1 - 2024/07/30 (火) 21:29:30 - VV 普段よく拝見させていただいております。 PCRの反応系について質問させてください。 PCRの反応系は皆さんどれくらいで実施されているでしょうか。(10µl？20µl?) 私は基本的に全量10µlになるように調整しているのですが、試薬のコストも馬鹿にならないので、最近は5µl系で実施しています。 ただ、あまり総量を少なくすると、結果が不安定になるのではないかと危惧しています。どれくらいの総量が最もPCR反応が安定するか(もちろんサンプルによっても少し異なるでしょうが)お分かりになる方いらっしゃるでしょうか？

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